Bakteri cinsi Mycobacterium’un üyeleri, hücre duvarlarında büyük miktarlarda lipit (yağlı) maddeler içerir. Bu yağlı mumlar, sıradan yöntemlerle lekelenmeye direnir. Bu cins, önemli insan hastalıklarına neden olan türler içerdiğinden (tüberküloz ajanı bir Mycobacterium’dur), teşhis laboratuvarı bunları klinik örneklerde veya kültürlerde ortaya çıkarmak için özel boyalar kullanmalıdır.

Bu organizmalar, ısı ile veya konsantre bir çözelti içinde uygulanan karbolfuksin gibi bazik bir boya ile boyandığında, leke lipid hücre duvarına nüfuz edebilir ve hücre sitoplazmasına ulaşabilir. Sitoplazma lekelendiğinde, çözülemeyen ve mikobakteriyel lipid duvarının altına nüfuz edemeyen asit-alkol gibi sert ajanlarla bile renk açmaya direnir.

Bu boyama koşulları altında, mikobakterilerin aside dirençli olduğu söylenir. Hücre duvarları yüksek konsantrasyonlarda lipid içermeyen diğer bakteri, karbolfuksin ile boyandıktan sonra asit-alkol ile kolayca renklendirilir ve asitsiz oldukları söylenir. Tıbben önemli bir cins olan Nocardia, kısmen aside dirençli türler içerir.

Zayıf (% 1) bir sülfürik asit çözeltisiyle renk giderilmesine direnirler, ancak asit-alkol ile işlendiklerinde karbolfuksin boyasını kaybederler. Aside dirençli teknikte, fuksinin hücreler içinde renklerinin giderilip giderilmediğini ve ikinci lekenin alınıp alınmadığını göstermek için bir karşıt boya kullanılır.

Carbolfuchsin’i ısı ile uygulamak için orijinal teknik, adını 1800’lerin sonlarında geliştiren iki bakteriyologdan alan Ziehl-Neelsen boyası olarak adlandırılır. Tekniğin sonraki modifikasyonu, leke penetrasyonunu sağlamak için ısıdan ziyade daha konsantre karbolfuksin reaktifi kullanır ve “Kinyoun boyası” olarak bilinir.

Günümüzde birçok klinik laboratuvarda daha modern bir floresan tekniği kullanılmaktadır. Bu yöntemde hasta numunesi, ultraviyole ışık kaynağına maruz kaldığında floresan veren boya otoramini ile boyanır. Aside dirençli herhangi bir basil bu boyayı aldığından ve bir flüoresans mikroskobu ile görüntülendiğinde koyu bir arka plana karşı parlak bir şekilde floresan ışıldadığından, yayma 1000 (yağa daldırma) büyütme yerine 400 (yüksek kuru) büyütme altında incelenebilir.  Sonuç olarak slayt, aside dirençli basillerin varlığı açısından daha hızlı taranabilir.

Nitrik asit Paslanmaz çelik
Paslanmaz çelik pasivasyon Nedir
Eliogard
Paslanmaz asit TEMİZLEME
Mermer Koruyucu Kaplama
Mermer masa koruyucu Cila
Paslanmaz Pasivasyon nasıl yapılır
Paslanmaz Pasivasyon Sıvısı

Amaç
Aside dirençli tekniği öğrenmek ve klinik bir numuneyi boyamak için kullanıldığında değerini anlamak için;

Malzemeler

Mycobacterium phlei’nin (bir saprofit) genç bir eğik kültürü
Bacillus subtilis’in 24 saatlik et suyu kültürü
Huzurevinden 70 yaşındaki bir erkeğin balgam örneğini taklit eden bir balgam örneği,
göğüs ağrısı ve kanlı balgam ile hastane
Gram boyama reaktifleri
Asit-alkol solüsyonu
Metilen mavisi
Slaytlar
Elmas cam işaretleme kalemi
Kalem veya kalem işaretleme
2 adet 3 cm filtre kağıdı şeridi
Kaydırmalı raf

Prosedürler

1. Her kültürden iki sabit smear ve simüle edilmiş balgamdan iki tane hazırlayın. Uygulamada, yaymalar bir dakika boyunca metanol ile sabitlenir veya mevcut tüberküloz basillerinin öldüğünden emin olmak için 65 ila 75 ° C’de ısı ile sabitlenir. Agar eğik kültürün yayılmasını sağlamak için önce üzerine bir damla su koyun. kaydırın ve sonra bu damlada küçük bir miktar kolonyal büyümeyi emülsiyon haline getirin.
2. Her zamanki gibi işaret kaleminizle her çiftten bir slaydı çalın ve kodlayın.
3. Her bir çiftin diğer slaytları, elmas kalemle kodlanmış ve sağlamlaştırılmış, uzun süreli boyama işlemi sırasında bile izlerin kalması gerekir.
4. Gram, 2. adımda kurşun kalem veya kalemle işaretlenen slayt setini boyayın.
5. Elmas çizik slaytları Kinyoun tekniği ile boyayın:
a. Varsa, slaytları metal boyama tepsisinin üzerine uzatılmış bir slayt rafına yerleştirin.
b. Lekeyi slaytta tutmak ve çözülmemiş boyayı filtrelemek için smearı 2 adet 3 cm’lik filtre kağıdı ile kapatın.
c. Slaytı konsantre carbolfuchsin solüsyonu ile yıkayın ve beş dakika bekletin.
d. Slaytlardan filtre kağıdı şeritlerini çıkarmak ve şeritleri bir atık kabına yerleştirmek için forseps kullanın. Slaytları suyla durulayın ve boşaltın.
e. Lekeleri asit-alkol solüsyonuyla örtün ve iki dakika bekletin.
f. Tekrar suyla durulayın ve boşaltın.
g. Metilen mavisi ile yıkayın ve bir ila iki dakika zıt boyama yapın.
h. Durulayın, boşaltın ve havayla kurutun.
6. Tüm slaytları yağa daldırma altında inceleyin ve Sonuçlar altındaki gözlemleri kaydedin. 

Sorular

1. Diferansiyel leke nedir? Bu tür lekelere iki örnek verin.
2. IsaGramstainanasit-hızlı leke yerine yeterli ikame?
3. Laboratuvardan aside dirençli boyama yapmasını ne zaman istemek uygundur?
4. Klinik geçmiş ve Gram ve aside dirençli yaymalarla ilgili gözlemleriniz ışığında, hastanın hastalığına dair kesin teşhisiniz nedir? Bu ön laboratuvar teşhisi nasıl doğrulanmalıdır?
5. Saprofitik mikobakteri asit hızlı mıdır?
6. Bir klinik örnekte aside dirençli organizmaların varlığı her zaman ciddi klinik hastalığı gösterir mi?
7. Pulmoner Nocardia enfeksiyonundan şüphelenilen bir hastadan alınan balgam örneğinin aside dirençli boyası nasıl yapılmalıdır?

Özel Lekeler

Bazı bakteriler, tanımlanmaları için taksonomik değere sahip olabilen karakteristik yüzey yapılarına (kapsüller veya flagella gibi) ve iç bileşenlere (örn., Endosporlar) sahiptir. Belirli bir organizmanın bir kapsüle sahip olup olmadığını, kamçılı olup olmadığını veya endospor oluşturup oluşturmadığını göstermek gerektiğinde, özel boyama teknikleri kullanılmalıdır.

Pek çok bakteri türü, karbonhidrat veya gliko-proteinden oluşan bir dış kapsüle sahiptir. Streptococcus pneumoniae (bakteriyel pnömoninin başlıca nedeni) ve Klebsiella pneumoniae (pnömoni ve yara ve idrar yolu enfeksiyonlarının bir nedeni) gibi birkaç patojenik tür, fagositik hücrelerin yutulmasını önleyerek virülansa katkıda bulunan iyi gelişmiş kapsüllere sahiptir ve bakterileri öldürmek gerekir.

Kapsüller boyama ajanlarını tutmaz, ancak basit, spesifik olmayan bir negatif boyama tekniği kullanılarak mikroskobik olarak görülebilir hale getirilebilir. Küçük bir damla çini mürekkebi veya nigrosin, bir cam slayt üzerindeki bakteri hücreleri süspansiyonuna eklenir. Bu maddeler hücrelere nüfuz etmez (veya çevreleyen kapsülleri boyar), ancak kapsülleri geride bırakan arka plan lekeleri olarak işlev görür.

The post Asite Dayanıklı Lekeler – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).