NPC’de sıcaklığın etkisine ilişkin erken gözlemler, genel bir kural olarak, sıcaklıktaki bir artışın tutmada bir azalmaya yol açtığını gösterdi; ancak bu genelleme, çözücüdeki spesifik polar değiştiriciye bağlıdır; örneğin etanol, tutulmada bir artışa neden oldu.

Daha yeni çalışmalar, sıcaklık etkilerinin durağan fazın doğasına bağlı olduğunu ve incelenen en polar fazın, sıcaklık artışıyla birlikte tutmada en büyük azalmayı sağladığını göstermiştir.

Sıcaklığın alıkonma üzerindeki değişken etkisinin alternatif bir açıklaması, durağan faza adsorbe edilen nispi su miktarlarına atfedilmiştir, bu da durağan fazın polaritesiyle ilgilidir. Bu etkilerin bir özeti gösterilmektedir. Bununla birlikte, genel olarak, 40 ° C’nin üzerindeki sıcaklıklar, tutmada bir artışa neden olurken, bunun altında, tutmada bir azalma vardır.

Diğer Hususlar

Normal faz sabit fazlar genellikle ters faz sabit fazlardan daha az kararlıdır. Yaygın bir bulgu, çözünen maddenin karbonil grupları ile Schiff bazlarının oluşumu yoluyla amino kolonlarının bozulmasıdır, ancak bir yeniden etkinleştirme yöntemi önerilmiştir.

NPC’nin temel avantajı, suda sadece az çözünür olan türleri ve ayrıca çok hidrofilik olan ve ters faz desteğinde tutulmayan türleri ayırma yeteneğidir.

Dahası, NPC desteklerinin mevcudiyeti, numunenin hidrofilikliğinin bir başka seçicilik özelliği olarak kullanılmasına izin verir. NPC, RPC kadar popüler olmasa da, şimdiye kadar yüksek organik çözücü konsantrasyonlarında kararsız olarak kabul edilen birçok biyomolekülün, NPC kullanılarak verimli bir şekilde kromatografiye tabi tutulabileceğinin farkına varılmasıyla birlikte giderek daha fazla kullanılmaktadır.

Dad dedektör nedir
HPLC dedektörleri
Sıvı Kromatografisi Nedir
Rid dedektör nedir
Hplc Nedir
HPLC cihazı
Hplc nasıl kullanılır
Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografisi

Yüksek Performanslı Ters fFazlı Kromatografi

Kullanılan tüm kromatografik teknikler arasında ters fazlı HPLC, bu kromatografik modda gerçekleştirilen tüm analitik ayırmaların en az% 60’ı ile en popüler olanıdır. Ters fazlı kromatografi terimi, ilk olarak, sulu elüentler ile parafin yağı ve n-oktan’ın sabit bir fazı üzerinde sıvı-sıvı kromatografisi gerçekleştiren Howard ve Martin (1950) tarafından türetilmiştir.

Böyle bir bölme sisteminde, bir polar sabit faz ve daha az polar bir mobil faz kullanan geleneksel metodoloji, mobil fazın durağan fazdan daha polar olmasıyla tersine çevrildi.

Ters faz kromatografisi, durağan faz ile hareketli faz arasındaki çekici kuvvetlerin baskın olduğu diğer çoğu kromatografi tekniklerinden farklıdır. Ters fazlı kromatografide, durağan faz genellikle inert bir hidrokarbondur ve genellikle çözünen madde ile tek etkileşimler hidrofobiktir ve seçiciliğe solvent etkileri hakimdir.

Tipik olarak, ters fazlı kromatografide kullanılan mobil fazlar, ya tek başına su ya da su artı bir organik modifiye ediciden oluşur, ancak son zamanlarda sulu olmayan mobil fazlarda daha fazla ilgi ifade edilmiştir. Bu farklı mobil fazlar, sırasıyla düz sulu, karışık sulu ve susuz ters faz kromatografisi anlamına gelen PARP, MARP ve NARP kısaltmalarıyla sonuçlanmıştır.

Ters faz kromatografisinin genel modundaki varyasyonlar bol olmakla birlikte, bu alanda hızlı gelişmeler devam ederken, bu bölümün sonraki bölümlerinde genişletilecek olan tekniğin genel bir taslağı verilebilir.

Sabit faz genellikle n-oktadesil ligandlarının kovalent olarak bağlandığı küresel silika partiküllerinden oluşur. Diğer popüler ligandlar, n-oktil ve fenildir. Silika mikropartiküllerinin çapı genellikle analitik uygulamalar için 25 um’den küçüktür, ancak hazırlayıcı HPLC’de bu çap genellikle daha büyüktür.

Sabit faz genellikle 4-5 mm iç çapa ve 50-300 mm uzunluğa sahip paslanmaz çelik analitik kolonlar halinde paketlenir, ancak son zamanlarda daha kısa kolonlar ve daha küçük çaplı paketlere doğru bir eğilim vardır.

En popüler mobil fazlar sulu veya sulu artı metanol veya asetonitril gibi organik bir değiştiricidir. Mobil fazlar genellikle analitik bir kolondan 0.5-2 ml / dk’da pompalanırken, hazırlayıcı kolonlardan akış hızları genellikle çok daha yüksektir.

Ters faz modunun popülaritesi, potansiyel kromatografi için sahip olduğu sayısız avantaj nedeniyle anlaşılabilir bir durumdur. Bu avantajların en büyüğü, hareketli faz bileşiminin çeşitliliği yoluyla geniş bir çözücü etkisinin kullanılmasına izin veren sabit fazın eylemsizliğidir; örneğin, tuzların eklenmesi ve hareketli faz pH ve sıcaklığının değiştirilmesi.

Bu bölümde, yukarıda tartışılan ters fazlı kromatografinin her yönü, potansiyel kromatografi mobil faz ve durağan fazın birçok olası kombinasyonu boyunca yönlendirmeye vurgu yapılarak daha ayrıntılı olarak ele alınacaktır.

Sabit Fazlar

Ters faz kromatografisinde en yaygın kullanılan sabit faz, silikaya kovalent olarak bağlanmış oktadesilsilan gruplarından (ODS) oluşur; bununla birlikte, farklı kromatografik karaktere sahip bir dizi farklı ODS paketi kullanılmaktadır ve bunlar bu bölümde ele alınacaktır. Ek olarak, ODS’nin yanı sıra bir dizi farklı fonksiyonel grup silikaya bağlanabilir ve bunlardan daha popüler olanlarından bazıları da tartışılacaktır.

Oktadesilsilan (ODS) Salmastralar

ODS ambalajları genel olarak monomerik ve polimerik fazlara ayrılabilir. Monomerik fazlar genellikle bağlı ligand tarafından daha homojen bir silika kaplamasına sahiptir ve nispeten daha düşük bir karbon yüküne sahiptir, bu da yüksek oranda serbest silanol gruplarına neden olabilir.

Bu nedenle, tamamen uç başlıklı olmayan monomerik ambalajlar, geleneksel solvofobik etkileşimlere ek olarak bölme etkilerinin ortaya çıkması nedeniyle karışık bir kromatografik ayırma mekanizması sergileyebilir. Monomerik fazlar genellikle polar çözünen maddelerin ayrılması için polimerik ODS fazlarından daha etkilidir.

Polimerik fazlar genellikle nispeten yüksek bir karbon yüklemesine sahiptir, ancak yoğun hidrofobik zincirlerin doğası nedeniyle polar bileşikler için zayıf kütle transfer özellikleri gösterir.

Polimerik fazlar genellikle orta polariteli çözünen maddelerin ayrılması için ve ayrıca polar olmayan bileşikler için tavsiye edilir. Ayrıca, polimerik fazlar daha yüksek bir karbon yüklemesine sahip olduğundan, kolonlar yüksek bir numune yükleme kapasitesine sahiptir ve preparatif kromatografi için daha yararlı da olabilir.

The post Oktadesilsilan (ODS) Salmastralar – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).