Araçsal karşılaştırılabilirliği değerlendirmek için iki Beckman CE araç modeli (MDQ’ya karşı PA 800) kullanan bir karşılaştırılabilirlik çalışması gerçekleştirildi. Bu çalışmada, her model kullanılarak bir antikor için pl değerleri belirlendi. Tablo 8’de gösterildiği gibi, iki cihaz, her bir tepe noktası grubu için karşılaştırılabilir pI değerleri ve karşılaştırılabilir% düzeltilmiş alanlar üretti.

Görüntülenmiş cIEF

Mobilizasyon adımı olmaksızın odaklanma sürecinin gerçek zamanlı izlenmesi, görüntü cIEF (i-cIEF) olarak tanımlanır. Mobilizasyon adımının ortadan kaldırılması, bir QC ortamında kullanım prosedürünü önemli ölçüde basitleştirir. Bir monoklonal antikor için geleneksel cIEF (bir Beckman PA 800 kullanılarak) ve görüntülenen cIEF’in (Yakınsak Biosciences iCE kullanılarak) bir karşılaştırma çalışması gerçekleştirildi ve e-gramlar Şekil 26’da gösterildi.

Panel A, geleneksel cIEF yöntemi kullanılarak analiz edilen bir antikorun bir e-gramını gösterir ve Panel B, görüntülenen cIEF yöntemi kullanılarak bir e-gram gösterir. Geleneksel cIEF’deki mobilizasyon adımı, e-gramı tersine çevirerek asidik türler olan A ve B türleri ana tepeden sonra göç ederken, görüntülenen cIEF, karşılık gelen A ve B türleriyle sonuçlanan gerçek zamanlı odaklama profilini yakalamak için CCD kamera kullanır. ana tepeden önce görünür. Genel olarak, iki teknik, geleneksel cIEF için biraz daha yüksek bir çözünürlükle benzer sonuçlar verdi.

Convergent Bioscience tarafından yeni piyasaya sürülen CFR 21 bölüm 11 uyumlu yazılım, görüntülenmiş cIEF’i terapötik proteinlerin veya antikor moleküllerinin salım testi için QC ortamlarında kullanım için uygun bir teknik haline getirir. i-cIEF, deamidasyon ve izomerizasyon gibi protein modifikasyonlarının karakterizasyonu ve ayrıca oligosakkarit yapı analizi için yoğun bir şekilde kullanılmıştır.

Galakto oligosakkarit Nedir
Oligosakkaritler
Sindirilemeyen oligosakkaritler
Oligosakkaritler Nedir
Oligosakkaritler hangileridir
Oligosakkarit analizi
Oligosakkarit nedir Biyoloji
Oligosakkaritler nelerde bulunur

Oligosakkarit Analizi için Kılcal Bölge Elektroforez

Glikoprotein farmasötiklerindeki karbonhidrat zincirleri biyolojik aktiviteleri için önemli rollere sahiptir. Oligosakarit yapısının analizi, moleküler karakterizasyon için gerekli bilgileri sağlar. İyi çözünürlük ve hassasiyetle oligosakkarit yapılarını karakterize etmek için birçok yöntem bildirilmiştir. Lazerle indüklenen floresans (CE-LIF) algılama ile CE’deki son gelişmeler, bir karışımın hızlı, yüksek çözünürlüklü ve yüksek hassasiyetli analizini sağlamıştır

Glikoprotein, N-bağlı glikanı serbest bırakmak için peptit N-Glikosidaz F (PNGaz F) kullanılarak sindirildi, ardından 8-aminopiren-1,3,6-trisülfonat (APTS) ile etiketlendi. Algılama, LIF’i argon iyon lazerle kullandı.

CE yönteminin kullanıldığı oligosakkarit analizi, HPLC yöntemine kıyasla daha hızlı çalışma süresi sağlar. Şekil 27, HPLC ve CE yöntemi kullanılarak oligosakarit analizinin bir karşılaştırmasını gösterir. Glikan analizi için ana zorluk, karbonhidrat molekülleri üzerinde kromofor veya iyonlaşabilir grupların olmamasıyla bağlantılıdır.

Bu zorluklar iki yaklaşımla ele alınmaktadır: (1) yüksek pH’ta çalışarak veya borat veya yüklü kompleksler oluşturarak analit hareketliliğini artırmak; ve (2) glikan moleküllerine ön kolon türevlendirmesi (kromoforlar veya floroforlar) yoluyla duyarlılığı arttırır.

APTS ile indirgeyici aminasyon, CE tarafından karbonhidrat analizi için yaygın olarak kullanılan tekniklerden biridir. Kimyasal türevlendirme, Şekil 28’de gösterilmektedir. Karbonhidrat moleküllerine bağlanan APTS, ayırma için hareketlilik ve floresan saptama için hassasiyet sağlar. Bu durumda, LIF tespiti 488 nm lazer dalga boyu gerektirir.

APTS etiketli CE oligosakkarit analizi, biyoteknoloji endüstrisinde uzun yıllardır kullanılmaktadır ve tekrarlanabilirlik göstermiştir. Artık terapötik protein ve antikorların salınması için GMP ortamında rutin olarak kullanılmaktadır. Şekil 29, analizin tekrarlanabilirliğini göstermektedir.

Protein Analizi için Kılcal Alan Elektroforez

CIEF’de olduğu gibi, CZE, proteinleri yük ve boyut farklılıklarına göre ayırır ve ayrıca bir saflık veya kimlik testi olarak da etkili olabilir. CZE, CE-SDS ve cIEF’ten önemli bir yönden farklıdır: Elektroforetik hareketliliğe dayalı olarak proteinleri dedektörden seçici olarak geçirmek için serbest çözelti (bölge) kimyası kullanır. Bir CZE yönteminin seçiciliği, elektroozmotik akışa (EOF) göre protein hareketliliğini etkileyen bir dizi değişkene bağlıdır.

Tampon tipi, tampon tuzu konsantrasyonu, pH, ayırma voltajı ve süresinin, kapiler sıcaklığın ve kaplanmış kapilerlerin kullanımının dikkatli optimizasyonu, protein ayrımını en üst düzeye çıkarabilir. Yöntem geliştirme faaliyetleri arasında, arka plan elektrolitlerinin (BGE) optimize edilmesi, protein konsantrasyonu, numune hazırlama (tuzdan arındırma), enjeksiyon tipi ve parametreleri, kılcal tip, kılcal ID ve saptama dalga boyu ve / veya modu yer alır.

CZE için çalışma parametreleri, ilgili proteine ​​bağlı olarak büyük ölçüde değişebilir. Aşağıdaki tartışma, bir glikoproteinin analizi için CZE’nin kullanımına ilişkin özel bir örnek içermektedir.

CZE’de Numune Hazırlama

Çoğu CZE ayrımı, çalıştırma tamponundaki iletkenliğe (örneğin tuz konsantrasyonu) çok duyarlıdır. Bu nedenle, numune enjeksiyonundan yüksek miktarda tuz verilmesini önlemek için, numuneler analizden önce uygun bir düşük tuz tamponu ile tampon değiştirilmelidir. Santrifüjlü UF / DF cihazları, tipik olarak çok tekrarlanabilir olduklarından ve analiste nihai numune konsantrasyonunu kontrol etmede daha fazla esneklik sağladıklarından bu amaç için idealdir.

Protein konsantrasyonunun optimize edilmesi (yani enjekte edilen protein miktarı), duyarlılığa karşı çözünürlüğü dengelemeyi gerektirir. Aslında, daha fazla protein enjekte etmek, küçük pikler için daha fazla hassasiyetle sonuçlanabilir, ancak kötü çözümlenmiş piklerin ayrılması olumsuz yönde etkilenebilir. Şekil 30’daki örnek, bu etkiyi göstermektedir. İdeal yükleme koşullarının optimizasyonu, yeterlilik için doğrusallık testi sırasında gerçekleştirilmelidir.

CZE yönteminin amacına bağlı olarak dikkate alınması gereken numune hazırlamanın diğer yönleri, numune denatürasyonu, indirgeme ve / veya türetme ve bir IS kullanımıdır. IS, analizler arası hafif değişkenliğin normalizasyonuna ve yöntem sorun gidermeye yardımcı olmak için CE ayrımlarında yaygın olarak kullanılmaktadır.

CZE’de Ayırma Koşulları

Genel olarak ayırma koşulları, numune, cihaz, algılama, kapiler, tampon, ayırma voltajı, zaman ve polarite dahil olmak üzere tüm sistemi ifade eder. Yine, CZE yöntemlerinin sağladığı geliştirme esnekliği nedeniyle, bu değişkenlerin her birine özel dikkat gösterilmesi gerekebilir. Yöntem optimize edildikten sonra, yeterlilik testi belirli yönlerin daha fazla iyileştirilmesi gerektiğini gösterebilir. Bir cGMP veya QC ortamında rutin olarak kullanılan çoğu analitik yöntemde olduğu gibi, yeni teknoloji, duyarlılık ve sağlamlık açısından iyileştirme için testlerin rutin olarak değerlendirildiği dinamik bir yaşam döngüsü mevcuttur.

The post Oligosakkarit Analiz – Farmasötik Analiz İçin Kapiller Elektroforez Yöntemleri – Ayırma Teknolojisi – FARMASÖTİK ANALİZ – Kimya Mühendisliği – Ayırma Teknolojisi Ödevleri – Kimya Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).