Kompleman bileşenleri C5, C6, C7, C8 ve C9, terminal yolu oluşturur. C5, klasik veya alternatif yol C5 konvertazları (sırasıyla C4b2a ve C3bBbP) ile aktive edilebilir.

Etkinleştirilmiş C5, C6’ya bağlanır ve kalan bileşenler C7, C8 ve C9 sırayla bağlanır. Altı C9 molekülü bu komplekse bağlanacak ve üzerinde bulunduğu hücrenin zarında bir gözenek oluşturacaktır. Bu, hücrenin parçalanmasına yol açabilir ve aşağıda açıklanan hemolitik deneylerde kullanılan bir özelliktir.

Kompleman aktivasyonunun biyolojik olarak aktif ürünleri

Kompleman sisteminin ana işlevlerinden biri, C3b’yi mikroorganizmaların yüzeyinde biriktirmektir ve yukarıda açıklandığı gibi bu, klasik veya alternatif yollardan meydana gelebilir. Mikroorganizmaların yüzeyinde bulunan C3b, bunların nötrofiller gibi fagositler tarafından C3b reseptörleri aracılığıyla alımını arttırır ve ayrıca hücreleri uyarır.

Antikor ve antijenin immün kompleksleri tarafından klasik yolun aktivasyonu, bu tür komplekslerin çözünürlüğünü arttırır ve kırmızı kan hücreleri üzerindeki kompleman reseptörleri tarafından dolaşımdan uzaklaştırılmasına yardımcı olur.

Yukarıda bahsedildiği gibi, C5b-C9 kompleksleri, C9 polimerlerinin hücre zarına sokulmasıyla mikroorganizmaların parçalanmasına neden olabilir. Seyirci hücrelerin parçalanması, C3 reseptörü CR1, bozunma hızlandırıcı faktör (DAF), membran kofaktör proteini (MCP) ve C9’un polimerizasyonunu önleyen CD59 tarafından korunmadıkça meydana gelebilir.

C4, C2, C3, faktör B ve C5’in aktivasyonu, nispeten küçük fragmanların salınmasıyla sonuçlanır. En önemli ikisi vazoaktif olan ve mast hücrelerinden histamin salgılayan anafilatoksinler C3a ve C5a’dır. C5a ayrıca nötrofilleri ve monositleri aktive eden güçlü bir kemotaktik ajandır.

Kompleman Aktivasyonunun Kontrolü

Gereksiz yere bir inflamatuar yanıtın oluşmasını önlemek için komplemanın spontan aktivasyonunun kontrol edilmesi gerekir. Klasik yol, serum proteinleri C1 inhibitörü (C1-inh), C4bp ve faktör I ve hücre yüzeyi molekülleri membran ko-faktör proteini (MCP), bozunma hızlandırıcı faktör (DAF, CD55) ve CR1 tarafından düzenlenir.

Alternatif yol, H ve I faktörleri ve MCP, DAF ve CR1 tarafından düzenlenir. Tüm bu faktörler, bir veya daha fazla aktive edilmiş kompleman proteini veya kompleksinin bozunmasını hızlandırır ve dolayısıyla kompleman aktivasyonu, ancak aktive edici uyarıcı, engelleyici mekanizmaların üstesinden gelmek için yeterli aktif ürünler üretebilirse gerçekleşir.

Membran atak kompleksi nedir
Kompleman sistem Yolakları
Kompleman sistem nedir
Kompleman sistemi nedir Tıp
Kompleman aktivasyon yolları
İmmünoloji kompleman sistemi
Kompleman eksikliği Hastalıkları
Kompleman Ne Demek Tıp

Serum Kompleman Seviyelerinin Tahlili

Numune hazırlama ve saklama

Kompleman testi için numunelerin yanlış saklanması, bazı bileşenler aşırı derecede kararsız olduğundan seviyelerin düşmesine neden olabilir. Serumdaki münferit bileşenlerin tahlilleri için kan numuneleri, damar delinmesinden sonra mümkün olan en kısa sürede laboratuvara ulaşmalıdır.

Kan, oda sıcaklığında 30 dakika pıhtılaşmaya bırakılmalı, ardından serum 2-4 C’de ayrılmadan önce pıhtı retraksiyonunun gerçekleşmesi için numune 1 saat buz üzerine yerleştirilmelidir. Numuneler bölünerek mümkün olduğunca çabuk 70 C’de saklanmalıdır.

Kullanım için numuneler 37°C’de çözülmeli, ardından hemen buza yerleştirilmelidir: tekrar tekrar dondurma ve çözme, bileşenlerin hemolitik aktivitesini azaltacaktır.

EDTA’ya toplanan kan (ki bu kalsiyum ve magnezyumu şelatlayarak daha fazla kompleman aktivasyonunu önler ve bu nedenle bu tür numuneler aktivasyon ürünü deneyleri için uygundur), trombositten fakir plazma üretmek üzere döndürülmeden önce mümkün olduğunca kısa süre buz üzerinde tutulmalıdır. serumda olduğu gibi saklanır. Doku kültüründen alınan numuneler, PMSF gibi proteinaz inhibitörlerinin eklenmesinden yararlanabilir.

İmmünokimyasal Testler

Bu testler, bireysel kompleman bileşenleri için spesifik olan ve ticari olarak kolaylıkla temin edilebilen antikorları kullanır ve nefelometrik, ELISA veya immünodifüzyon testleri için kullanılabilir. Poliklonal antikorlar, araştırılan bileşenin parçalanma ürünlerini tanıyabileceğinden ve elde edilen sonuç değeri, mevcut fonksiyonel protein seviyesini yansıtmayabileceğinden, antikor seçimi kritiktir.

Kullanılan tahlil sisteminin tipi, yapılan tahlillerin sayısına, gereken duyarlılık düzeyine, analitin düzeyine ve mevcut antikorun kalitesine bağlıdır. Örneğin, nefelometri, seviyelerin 50 mg/ml veya üzerinde olduğu hasta numunelerinde C3, C4, C1-inh ve C1q’yi ölçmek için rutin klinik immünoloji laboratuvarlarında kullanılır.

Bununla birlikte hücre kültürü çalışmaları için seviyeler 1 ng/ml kadar düşük olabilir ve ELISA daha emek yoğun olmasına ve gerçekleştirilmesi daha uzun sürmesine rağmen daha pratiktir.

Radyal immünodifüzyon ve jel roket teknikleri, zaman alıcı ve özellikle hassas olmasa da, nispeten basittir ve bozunma ürünlerinin, örn. C3d ve kompleman bileşenlerinin anormal formlarının tespiti için çift katlı roket immünoelektroforezi, örn. Normal insan serumu (NHS) ve C8-eksik serumun anti-C8’e karşı Ouchterlony immünodifüzyonu, C8 zincir eksikliğini düşündüren kısmi özdeşlik çizgileri ortaya çıkarabilir.

Bu tip tahlillerde kullanılan tamponlar, antikor bağlanması için optimal olanlardır ve genellikle fosfat tamponlu salin (PBS) kullanılır.

Hemolitik Kompleman Tahlilleri

CH50 testleri

MAC hücre zarına monte edilirse ve C9 polimerleri yerleştirilirse, kırmızı kan hücrelerinin tamamlayıcı tarafından parçalanması gerçekleşir. Testler, tüm gerekli bileşenlerin varlığına ve tamamlayıcı aktivasyonu için uygun koşullara bağlıdır.

Bu tahlillerin en basiti, tüm klasik ve terminal tamamlayıcı bileşenleri içeren bir numuneye ve bileşenlerin işlevsel olarak aktif olmasına dayanan nicel bir prosedür olan CH50’dir.

Tahlil, kalsiyum ve magnezyum iyonlarının (klasik yol aktivasyonu için gereklidir) varlığında gerçekleştirilir ve yol, koyun kırmızı kan hücrelerinin (EA) yüzeyinde IgM’nin varlığı ile başlatılır.

Alternatif yol için benzer bir tahlil olan APH50, C3bBb bağlanması için bir yüzey sağlayan tavşan eritrositlerini kullanır. Magnezyum iyonlarını değil de kalsiyumu şelatlayarak EDTA’nın eklenmesi, alternatif yolun aktivasyonuna izin verirken klasik yolun herhangi bir eşzamanlı aktivasyonunu önleyecektir.

Bu tahlillerin tüm bileşenleri içerdiği bilinen numunelerle kontrol edilmesi gerekir, örn. taze NHS (pozitif kontrol) ve eritrositlerin spontan lizizini ölçmek için tek başına tampon (negatif kontrol) ile yapılır.

Testin nicelleştirilmesi, hemoliz miktarının (hücre süpernatantının optik yoğunluğu ile ölçülen, salınan hemoglobin miktarıyla orantılıdır) bilinen bir normal NHS ile tek tüplü bir yöntemde karşılaştırılması veya seyreltme yoluyla gerçekleştirilebilir. bir dizi hemoliz elde etmek için test örneğini çıkarın.

The post Membran Saldırı Kompleksi – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).