Antikor veya antikorların konsantrasyonu, klinik amacı için testin çalışma aralığını optimize etmek için seçilir, genel olarak daha düşük analit konsantrasyonları için daha düşük antikor konsantrasyonları gerekir.

Standart eğrinin dik kısmı ve en yüksek hassasiyet aralığı, konsantrasyon aralığına karşılık gelmelidir. Çalışma aralığının sınırlamaları olduğu sonucu çıkar, örn. onkoloji için tasarlanmış bir insan koryonik gonadotropin testi, gebelikteki konsantrasyonların belirlenmesinde faydalı olmayacaktır.

Bir tahlilin optimizasyonunu sürdürmek için, seriler içinde ve gruplar arasında reaktif miktarları dışındaki birçok faktörün kontrol edilmesi gerekir. Reaksiyon hızı ve denge konumu sıcaklığa, pH’a ve iyonik güce bağlıdır.

Yapısal olarak ilişkili moleküllerin çapraz reaktivitesi de bu değişkenlerdeki değişikliklerden etkilenecektir. Mümkün olduğunca bu faktörler, özellikle numune matrisi sabit tutulmalıdır.

Bir reaksiyonun dengeye ulaşmasına izin verilmezse, zamanlamanın sabit olmaması kaymaya, yani numunenin parti içindeki konumuna göre sonuçta sistematik hataya neden olabilir. Otomatik analizörlerde bu faktörler yakından kontrol edilebilir, bu da laboratuvarlar içinde ve laboratuvarlar arasında sonuçların tutarlılığına yol açar.

Kalibrantlar veya standartlar, birçok madde için uygulanabilir alternatif bir test sistemi olmadığı için immünoanalizde özel bir zorluk teşkil edebilir. Polipeptit hormonları söz konusu olduğunda, rekombinant DNA teknolojisinin ortaya çıkışına kadar, immünoanaliz için kalibratörler sağlamak üzere fizikokimyasal yöntemlerle ölçüm için yeterli saf materyal hazırlamak mümkün değildi.

Bu nedenle, biyo-tahliller için hazırlanan Uluslararası Standartlar, bir dizi biyo-tahlil sistemi kullanan işbirlikçi çalışmaların fikir birliği olarak atanan birim ile immünoassayler için kabul edildi.

Sıcaklık Kalibrasyon Cihazı
Kalibrasyon cihazı Nedir
Isı Kalibrasyon Cihazı
Kalibrasyon Cihazı Fiyatları
Kalibrasyon Cihazları nelerdir
Kalibratör Nedir

Homojen Testler

‘Homojen’ terimi, bağlı ve serbest etiketin ayrılmasının gerekli olmadığı immünolojik testler için kullanılır. Bu tür sistemlerde sinyal, antikor bağlanmasıyla modifiye edilir, sonuç olarak bağlı ve serbest etiket reaksiyon karışımında ayırt edilebilir, örn. enzim etiketli analitin antikora bağlanması, enzimin aktivitesini sterik engelleme veya aktif bölgenin bozulmasını indükleyerek inhibe edebilir.

Bu sistem (EMITR, enzim-multiplied immunoassay tekniği, Syva) birçok kimya analiz cihazında kullanılabilir ve ilaçların ölçümü için yaygın olarak kullanılır. İlaç deneyleri için floresan polarizasyonu da kullanılır.

Başka bir örnek, analit kaplı lateks partiküllerinin antikor ile çapraz bağlanmasının, numuneden alınan serbest analit tarafından inhibe edildiği ve bulanıklığın azalmasına neden olduğu küçük moleküller için türbidimetrik immünolojik testtir. Analit büyük bir molekülse ve yeterince yüksek konsantrasyondaysa, antijen-antikor komplekslerinin oluşumu nefelometri ile ölçülebilir ve herhangi bir etikete gerek yoktur.

Büyük ve küçük analitler için homojen testler, yakın zamanda geliştirilen kriptatlarla mümkündür (Etiketler bölümüne bakın). Mevcut bazı homojen tahlil türleri Tablo 39.2’de verilmiştir. Bununla birlikte, bu tekniklerin çoğu genel olarak uygulanabilir değildir ve çoğu bağışıklık tahlili, bağlı ve serbest etiketin ayrılmasının gerekli olduğu heterojen tiptedir.

Fluke Kalibrasyon

Bu Standartlar, miligram albümin taşıyıcı ve eksipiyan içeren birkaç mikrogram analit içerir ve amino asit analizi gibi mutlak analiz yöntemleri kullanılamaz. ABD’de büyüme hormonu ve prolaktin testleri kitlesel olarak uygun olmayan şekilde kalibre edilmiştir.

Glikoprotein hormonlarının doğal heterojenliği, standardizasyon için büyük bir engeldir ve birbirini izleyen Uluslararası Standartlarda farklı biyoaktivite/immünoaktivite oranlarına yol açmıştır.

Uluslararası Standartların kullanımı, testler arasındaki farklılıkları en aza indirme eğilimindedir, ancak ortadan kaldırmaz. Serum bazlı standart referans materyalleri veya sertifikalı referans materyalleri, immünolojik testler matriks etkilerine tabi olduğundan, birincil kalibrant olarak kullanılamaz.

Nihai amaç, protein tahlillerini kütle veya molar terimlerle kalibre etmektir; bu, birçok analit için ciddi bir zorluktur. 

Etiketler

Birçok farklı tipte etiket veya haberci molekül kullanılmaktadır. Etiketleme prosedürleri, etiketli maddenin uygun antikor veya analite bağlanmasını bozmayacak şekilde tasarlanmıştır. Etiketin ölçümü (tespiti) daha fazla reaktif ve/veya oldukça özel ekipman gerektirebilir. Yaygın olarak kullanılan etiket türleri Tablo 39.1’de verilmiştir.

Radyoizotoplar kolayca saptanabilir, ancak tehlikeli olma ve özel kullanım ve imha prosedürleri gerektirme dezavantajına sahiptir. Etiketli molekül radyoaktif bozunmadan zarar gördüğünden, aynı zamanda kısa bir “raf ömrüne” sahiptirler. Otomasyonun gelişiyle, daha özel ve düşük hacimli tahlillerle sınırlı hale geldiler.

Floresan polarizasyonu yalnızca küçük haptenlerin ve ilaçların tahmini için uygundur, ancak diğer floresan yöntemleri çok çeşitli analitler için geçerlidir. Yaygın olarak kullanılan floroforlar, floresein, umbelliferon, luminol ve nadir toprak metallerini içerir.

Zamanla çözülen floresan teknikleri, nispeten uzun ömürlü bir floresan üreten lantanit şelatları kullanır; duyarlılık, endojen numune bileşenleri tarafından üretilen kısa ömürlü arka plan floresansı bozulduktan sonra okumalar alınarak geliştirilir.

Duyarlılık aynı zamanda büyük Stokes lantanit şelat kayması (yani uyarma ve emisyon tepe noktaları arasındaki dalga boyu farkı) ve arka plan flüoresansını azaltan çok dar emisyon maksimumları ile de artar.

Farklı lantanitlerin kullanıldığı çoklu etiketleme de mümkündür ve çoğullanmış ve minyatürleştirilmiş analiz için büyük bir potansiyel sunar. Lantanid iyonları ayrıca kriptat etiketlerinin bir bileşenidir; iyonlar büyük bir organik ‘kafes benzeri’ molekül, bir kriptan ile çevrelenir ve ortaya çıkan kriptat çok kararlı ve etkisizdir.

Zaman çözümlü güçlendirilmiş kriptat emisyonu tekniği, bir floresan vericiden (kriptat) uzaysal olarak yakın bir alıcı moleküle güçlendirilmiş ışıma olmayan enerji transferine dayanır. Böylece, bağlı ve serbest etiket emisyon spektrumları ile ayırt edilebilir ve hem büyük hem de küçük moleküllere uygulanabilen homojen bir test sistemine izin verir.

Kemilüminesansta, uyarılmış molekül bir kimyasal reaksiyonla üretilir; kemilüminesan substratlar, genellikle bir oksidatif reaksiyonla fotonlar (ışık) üretirler. Elektrokemilüminesansta, reaksiyon çözeltisine bir voltaj uygulanarak elektronik olarak ışık emisyonu başlatılır, bu da reaktif ekleme ve karıştırma ile ilgili sorunları ortadan kaldırır.

Enzimlerle etiketleme ve kolorimetrik, hız kolorimetrik, florimetrik veya kemilüminometrik uç noktalar veren substratlarla algılama, daha fazla hassasiyet ve daha geniş bir çalışma aralığı sağlar. Bu teknik, floresan veya kemilüminesansa uygulandığında, “enzimle güçlendirilmiş” veya “enzimle güçlendirilmiş” olarak tanımlanır.

Birçok antijen-antikor sisteminde yaygın uygulama kazanmış olan heterojen katı faz testinin bir şekli, enzime bağlı immünosorbent testi veya ELISA’dır.

Numune önce bir katı fazlı antikorla (tipik olarak bir mikrotitre plakası üzerinde) inkübe edilir, daha sonra herhangi bir bağlanmamış antijen yıkama yoluyla çıkarılır, ardından ikinci bir enzim etiketli antikor eklenir. Katı faza bağlanan enzim aktivitesi, yakalanan antijenin (yani analit) konsantrasyonu ile orantılıdır.

‘İdeal’ etiket arayışı devam ediyor; son gelişmeler, daha fazla hassasiyet sunan, spesifik bağlayıcı ajanlarla birleştirilmiş mikrometre altı boyutlu partikül etiketleri içerir.

The post Test Koşulları ve Kalibratörler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).