RPIP kromatografisinde, sıradan ters faz modunda olduğu gibi, mobil faz genellikle eklenmiş bir organik modifiye edici ile sulu olup, bu genellikle metanol veya asetonitrildir. NPIP kromatografisinde mobil faz genellikle değiştirici olarak heksan veya kloroformun eklendiği pentan-1-01’dir.

RPIP kromatografisinde, metanol veya asetonitril konsantrasyonunu artırmanın etkisi retenasyon süresini azaltmaktır. Bu kromatogramda, bileşiklerin elüsyon sırasının gösterilen aralıkta esasen değişmeden kalmasına rağmen, daha yüksek asetonitril konsantrasyonlarında, L-DOPA ve adrenalin elüsyonu tersine çevrilerek seçicilik üzerinde bir etki meydana gelebilir.

Asetonitril, düşük viskozitesi çalışma basıncını düşürdüğü için sıklıkla tercih edilen organik değiştiricidir; bu, karşı iyon reaktiflerinin genellikle oldukça viskoz olduğu iyon çifti kromatografisinde özellikle önemli olabilir. Asetonitril ayrıca dörtlü amonyum iyonları için daha büyük bir çözme gücüne sahiptir ve mobil fazda daha yüksek karşı iyon konsantrasyonlarının kullanılmasını kolaylaştırır.

p H

İyon çifti kromatografisini hesaba kattığı varsayılan spesifik mekanizmaların her birinde, ayırmanın gerçekleştirildiği pH’ın etkisi kesinlikle kritiktir.

Her ayırma için mobil fazın pH’ı, hem numunenin hem de karşı iyonun maksimum iyonizasyonunu kolaylaştıracak şekilde ayarlanmalıdır; Numunenin veya karşı iyonun kısmi iyonlaşmasının meydana geldiği ayrımlarda, genellikle tepe genişlemesi ile sonuçlanır. Mobil faz pH’sinin seçimi için belirli genel kurallar verilebilir:

(a) Tüm pH değerlerinde anyon veya katyon olan numuneler için, pH, karşı iyonun maksimum iyonizasyonuna izin verecek şekilde seçilmelidir.
(b) Asitler için çalışma pH’ı genellikle 7-8.5 pH aralığı ile sınırlandırılır ve daha sonra karşı iyon seçilir.
(c) Bazlar için mobil fazın pH’ı genellikle 2-6 aralığında olacak şekilde seçilir.

Mobil fazın pH’ı hem kapasite faktörünü hem de seçiciliği etkileyeceğinden, iyonojenik bileşikler içeren karışımların ayrılmasını optimize etmek için pH manipülasyonunun kullanılabileceği açıktır. Şu anda, ters faz ayrımlarında kullanılan neredeyse tüm sabit fazlar, 2-8.5 pH aralığı dışında kararsızdır.

RPIP kromatografisinin işleyişine ilişkin pratik bir sınırlama, karşı iyonların çoğunun, özellikle 2-8.5 aralığının dışındaki pH değerlerinde, kolonların bağlanmış fazındaki aşındırıcı aktivitesiyle ilgilidir. Yakın gelecekte, silika bazlı olmayan sabit fazların kullanımının, iyon çifti kromatografisinin potansiyel uygulamalarında bir artışa neden olacağı tahmin edilebilir.

Mobil faz Nedir
Normal faz kromatografisi
Sıvı Kromatografisi
HPLC Makale
HPLC sonuç değerlendirme
HPLC PDF
HPLC açılımı
HPLC cihazı ile yapılan analizler

Eklenen Tuzların Etkisi

Bir önceki alt bölümde, iyon çifti kromatografisinde ayrışmaların pH’ının dikkatlice kontrol edilmesi gerektiğine işaret edilmişti; bu nedenle bu tür bir kromatografi, sonuç olarak mobil fazın iyonik kuvvetini etkileyecek olan tamponların eklenmesini gerektirir. Genel olarak, ters faz modunda, tuz konsantrasyonundaki bir artış, tutmada bir azalmaya neden olurken, normal faz iyon çifti kromatografisinde, tuz konsantrasyonundaki bir artış, tutmada bir artışa neden olur.

RPIP kromatografisinde ergotaminin tutulması üzerindeki farklı tuzların etkisinin bir örneği gösterilmektedir. Kromatogramda, seçiciliğin tuz konsantrasyonundaki değişikliklerden etkilendiği açıkça gösterilmiştir.

Bazı bileşikler için tuz konsantrasyonundaki bir artışın tutma üzerinde hiçbir etkisi olmayabilir; bu, aşağıdakilerin karşıt etkilerinden kaynaklanıyor olabilir:

• (a) karşı iyonların rekabeti nedeniyle azalmış iyon çifti oluşumunun neden olduğu azalan tutma ve
• (b) sabit yüzeyde karşı iyonların artan adsorpsiyonundan kaynaklanan tutmada bir artıştır.

Karşı İyon Konsantrasyonunun ve Zincir Uzunluğunun Etkisi

Genel olarak, RPIP kromatografisinde, karşı iyon konsantrasyonundaki bir artış, numune tutulmasında bir artışa neden olur; tersi normal fazlı sistemler için doğrudur.

Aşağıda gösterildiği gibi, karşı iyon konsantrasyonu ile tutulmadaki artış doğrusal değildir ve daha yüksek karşı iyon konsantrasyonlarında eğilimin tersine dönmesi, karşı iyonların neden olduğu öne sürülen bir etkidir. mobil fazda etkin konsantrasyonlarını azaltan miseller oluşturur.

Bu nedenle kromatografı, karşı iyon konsantrasyonunu artırarak numune tutmayı artırmaya çalışırken biraz dikkatli olmalıdır.

Bir kromatografik sistemin seçiciliğinde bir değişiklik, karşı iyon konsantrasyonu arttıkça meydana gelebilir, ancak bu, her ayırma için kullanılan spesifik kromatografik parametrelere bağlıdır. Numune yüklemesinin arttırılmasının istendiği ayırmalarda, karşı iyon konsantrasyonunu artırarak kromatografiyi olumsuz etkilemeden bunu başarmak çoğu zaman mümkündür.

Bir RPIP ayırmada kullanılan karşı iyonun lipofilikliğindeki bir artışın etkisi, Şekil 8.3’te gösterilmektedir. Bir dizi alkil sülfatta iki metilen ünitesinin art arda eklenmesi, numune tutmada büyük artışlara neden olur. RPIP kromatografisinde karşı iyonun lipofilikliğini kolaylıkla manipüle etme yeteneği, bu tür ayırmaları optimize etmek için son derece uygun bir yöntem de sağlar.

Sıcaklığın Etkisi

RPIP kromatografisindeki tutma değerleri genellikle kolon sıcaklığındaki değişikliklere sıradan ters faz moduna göre biraz daha hassastır, ancak sıcaklık arttıkça aynı düşük k ‘değerleri eğilimi de gösterir.

Bununla birlikte, iyon çifti kromatografisindeki bazı ayrımların sıcaklıktaki değişikliklere diğerlerinden çok daha duyarlı olduğu unutulmamalıdır. Bu nedenle, kolon sıcaklıklarının sabit bir değerde tutulması ve tlus’un bir kolon termostatı kullanılarak kolayca elde edilmesi de önemlidir.

Özellikle viskoz karşı iyonlar içeren mobil fazlar, kolon sıcaklığı yükseldiğinde hem ayrılma hızı hem de pik şekli açısından önemli kromatografik gelişmeler gösterebilir, ancak bu koşullar altında kolonun ömrü, şunlara bağlı olarak biraz azalabilir. 

Yüksek Performanslı Afinite Kromatografisi

Yüksek performanslı sıvı afinite kromatografisi (HPLAC)

Son 20 yılda biyomoleküllerin saflaştırılmasındaki en önemli gelişme, afinite kromatografisinin uygulamaya konulması olmuştur. Bu bölümde tartışıldığı gibi afinite kromatografisi, biyospesifik afinite kromatografisine atıfta bulunur. Yumuşak jel matrisler üzerinde afinite kromatografisinin mükemmel bir incelemesi, bu serinin önceki bir baskısında da bulunabilir.

Prensipler

Yakınlık kromatografisinin ilkeleri son zamanlarda ayrıntılı olarak gözden geçirilmiştir ve yalnızca bir genel bakış sunulacaktır. Afinite kromatografisi, hareketsizleştirilmiş bir ligandın (Ln) sabit faza kovalent olarak bağlanmasını ve özellikle ilgili çözünen madde ile etkileşime girmesini de gerektirir.

The post Mobil Faz Bileşimi – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).