Kütle spektrometrisi (MS), uzun yıllardır gaz kromatografisi ile birlikte bir algılama modu olarak kullanılmıştır. 1 ml/dk akış hızına sahip tipik bir LC sisteminden akan büyük hacimli sıvı, başlangıçta LC ve MS kombinasyonunu engelledi.

Mikro delikli LC’nin (<1 mm iç çap) tanıtılması ve çok ince sıvı aerosollerin (elektrosprey) üretimindeki gelişmeler, LC-MS’nin uygulanabilir bir teknik haline gelmesiyle sonuçlanmıştır. LC–MS veya tandem MS (MS–MS), klinik laboratuvarda muhtemelen en hızlı büyüyen ayırma teknikleridir.

Biyolojik numuneler için ön numune hazırlama

Biyolojik numunelerin HPLC kullanılarak analiz edilmesinin bir komplikasyonu, birçok vücut sıvısındaki yüksek protein içeriğidir (plazma ve serumda yaklaşık 70 g/l).

Bu, arka plan paraziti üretebilir ve kolon tıkanmasına yol açabilir, bu nedenle genellikle analizden önce bir tür numune hazırlama gereklidir. Numune hazırlamanın tam şekli, spesifik uygulamaya göre değişecektir, ancak genellikle deproteinizasyon ve/veya ilgili bileşiğin ekstraksiyonu gerçekleştirilir.

Kan numunelerini içeren HPLC yöntemleri için hem sıvı-sıvı hem de katı faz ekstraksiyonları kullanılır. İdrar kullanıldığında, renkli veya flüoresan pigmentler mevcutsa UV veya flüoresan algılama yöntemlerinde girişim meydana gelebilir ve sıvı-sıvı veya katı fazda bir tür ekstraksiyon gerekli olacaktır.

Porfirinler nedir
Porfirinler
Porfirin nedir tip
Porfirin halkası
Porfirin biyosentezi
Porfirin METABOLİZMASI
Porfirin Nedir cilt
Hemoglobin porfirin

Uygulamalar

HPLC’nin laboratuvar tıbbındaki uygulamalarının çoğu klinik biyokimya alanına girer, ancak hematologlar da bu tekniği kullanır. HPLC tarafından klinik laboratuvarda düzenli olarak analiz edilen bileşik grupları arasında biyojenik aminler, amino asitler, porfirinler, ilaçlar, vitaminler, hemoglobin ve karbonhidratlar bulunur.

Nükleositler, kolajen bozunma ürünleri ve steroidler dahil olmak üzere araştırma amaçları için birçok başka özel uygulama tanımlanmıştır, ancak bunlar genellikle rutin test repertuarının bir parçası haline gelmemiştir.

Biyojenik aminler

Katekolaminler, adrenalin, noradrenalin ve dopamin ve bunların metabolitleri, nöral krest kaynaklı tümörlerin (feokromositoma ve nöroblastom) tespiti için plazma ve idrar numunelerinde ölçülür. Feokromositomalar, daha sonra 4-hidroksi-3-metil-mandelik aside (HMMA) metabolize olan büyük miktarlarda adrenalin ve/veya noradrenalin salgılar.

Feokromositoma hastalarından alınan idrarda hem katekolaminlerin hem de HMMA’nın artan konsantrasyonları, elektrokimyasal saptamalı ters fazlı HPLC kullanılarak saptanabilir. Bu teknik, çocuklarda nöroblastomlar tarafından üretilen anormal derecede yüksek miktarlarda dopamin ve metaboliti homovanilik asidi (HVA) saptamak için de kullanılabilir.

Serotonin (5-hidroksitriptamin, 5-HT) triptofandan sentezlenir ve monoamin oksidazlar tarafından 5-hidroksiindol asetik aside (5-HIAA) metabolize edilir.

Karsinoid tümörler anormal miktarlarda 5-HT salgılarlar ve kan/idrar serotonin konsantrasyonlarının veya idrar 5-HIAA atılımının ölçülmesi, tümörlerin saptanmasında ve tedavinin izlenmesinde faydalıdır. HMMA, HVA ve 5-HIAA’nın ters fazlı HPLC ile aynı anda belirlenmesine yönelik yöntemler, klinik laboratuvarlarda rutin olarak kullanılmaktadır.

Amino asitler

Amino asit metabolizması anormalliklerinin kalitatif tespiti için TLC kullanımı daha önce tarif edilmiştir. Spesifik amino asitlerin miktar tayini, özellikle fenilketonüri, tirozinemi veya akçaağaç şurubu idrar hastalığı gibi bozukluklarda tedavinin izlenmesi için sıklıkla gereklidir.

İlk uzman HPLC sistemi, renkli türevler üretmek için ninhidrin ile kolon sonrası reaksiyonu takiben spektrofotometrik algılama ile amino asitlerin katyon değişim kromatografisi ile ayrılmasına dayanan amino asit analizörüydü.

Artık amino asitleri UV, floresan veya elektrokimyasal algılama ile ters fazlı HPLC ile ayırmak için birçok alternatif türevlendirme yöntemi tarif edilmiştir.

Porfirinler

Porfirinler, hem biyosentetik yolun ara ürünleri olan porfirinojenlerin oksidasyonu ile oluşan siklik tetrapirollerdir. Spesifik enzim eksikliklerinin öncüllerin birikmesine yol açtığı bir kalıtsal hastalık sınıfı (porfiri) vardır.

Porfirilerin klinik prezentasyonu, kronik fotosensitiviteden akut karın ağrısına kadar çeşitlidir ve semptomlardan kesin tanı hakkında bir miktar fikir elde edilebilmesine rağmen, porfiri tipinin karakterizasyonu kan ve idrardaki porfirin paterninin tanımlanmasını gerektirir. 

Bu, porfirinlerin sıvı-sıvı ekstraksiyonu ve ardından porfirinler doğal floresansa sahip olduğundan, UV veya floresan algılama ile ters fazlı HPLC ile başarılabilir. HPLC ile porfirin ayırmanın bir örneği  gösterilmektedir.

İlaçlar

İmmünoassay teknikleri, yerleşik anti-konvülzanların çoğu için rutin yöntem olarak HPLC’nin yerini almıştır, örn. fenitoin, fenobarbiton, valproat ve karbamazepin. Bununla birlikte, lamotrijin, vigabatrin, gabapentin, topiramat, leviterasetam ve okskarbazepin dahil olmak üzere daha yeni nesil antikonvülzanlar, UV saptamalı ters fazlı HPLC ile ölçülür.

Bununla birlikte, geniş terapötik pencereleri (lamotrijin, topiramat ve leviterasetam) olduğundan veya plazma konsantrasyonları klinik ile zayıf korelasyon gösterdiğinden, yeni antikonvülzanların çoğu için terapötik ilaç izlemesinin önceki ilaçlara kıyasla daha az önemli olduğu düşünülmektedir. etkinlik (gabapentin, vigabatrin). Bu nedenle izleme, öncelikle tedaviye uyumsuzluk şüphesi olduğunda gerçekleştirilir.

Diğer uyuşturucular

Biyolojik sıvılardaki binlerce başka ilaç için tahliller geliştirilmiştir. Daha fazla bilgi arayan okuyucular, bu bölümün sonundaki İleri Okuma bölümüne başvurmalıdır. LC dahil ayırma tekniklerinin kullanımı, bir ilacın ana ilaçla birlikte ölçülmesi gereken aktif bir metabolitine sahip olduğu durumlarda özellikle önemlidir, örn. amiodaron, dothiepin, vb.

Glike hemoglobin dahil hemoglobinler

Hemoglobinin 400’den fazla yapısal varyantı bilinmektedir ve bunların çoğu birey için klinik sekelleri yoktur. Ancak bazı varyantlar hastalıkla ilişkilidir, örn. HbS (orak hücre hastalığının hemoglobini).

Kesin tanı, mevcut varyantın tanımlanmasını gerektirir. Nispeten yakın zamana kadar, hemoglobinlerin ayrılması elektroforez ile sağlanıyordu, ancak şimdi iyon değişim kromatografisine dayalı birkaç ticari özel HPLC sistemi ortaya çıktı. Bunlar daha hızlı numune çıktısına sahiptir ve hemoglobinopatiler için popülasyon taramasında faydalıdır.

Bu sistemlerde yapılan modifikasyonlar, 4-8 dakikalık bir analitik döngü süresi ile hemoglobinin glike edilmiş fraksiyonu HbA1c’nin nicelleştirilmesinde kullanılmalarını sağlar. Boronat jel afinite kromatografi yönteminin, kalıtsal hemoglobin varyantlarının varlığından etkilenmeme avantajına sahip bir HPLC versiyonu da mevcuttur.

HbA1c ölçümü için, endoproteinaz Glu-C ile hemoglobinin peptitlere ayrılmasını ve ardından HPLC-elektrosprey iyonizasyon-kütle spektrometrisi (ESI-MS) ile hekzapetidlerin ayrılmasını ve nicelleştirilmesini içeren bir referans yöntemi oluşturulmuştur.

The post Porfirinler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).