Bununla birlikte, tepe şeklinde herhangi bir bozulma varsa, bu, bitişik tepeler arasında örtüşme olasılığını artıracaktır. Yukarıdaki denklemde, W, plaka numarası (N) ile ikame edilebilir; daha sonra çözünürlüğü üç temel faktör açısından ifade eden bir denklem ortaya çıkarır; seçicilik a, kapasite faktörü k ‘ve plaka numarası N olur.

Bu nedenle:

RS = (1/4) X [(a-l) / a] X [k’B / (l + k’B)] XN.

Bu üç faktör bağımsız olarak optimize edilebilir. Seçicilik faktörü, çözünürlüğün belirlenmesinde en önemli faktördür ve daha önce tanımlandığı gibi, iki bileşen için kapasite faktörlerinin oranıdır. Açıkçası a, 1’e eşit olmamalıdır, yoksa çözüm olmayacaktır.

Seçicilik, sıcaklığın (difüzyon süreçlerini etkileyen) veya mobil veya sabit fazların bileşiminin değiştirilmesiyle değiştirilebilir.

A’nın optimizasyonu genellikle deneme yanılma yoluyla elde edilir ve en iyi yöntem, kapasite faktöründe küçük bir değişiklikle iyileştirmeye izin veren mobil fazın doğasını değiştirmektir. Durağan fazı değiştirmek pratik değildir.

Sıcaklığın değiştirilmesinin iyon değişim kromatografisinde diğer kromatografik modlara göre daha belirgin bir etkisi vardır. A’daki büyük değişiklikler, kimyasal kompleksleşme gibi ikincil yollarla elde edilebilir.

K’B / (l + k r B) terimi, tutma faktörü derecesi olarak adlandırılır ve esas olarak k ’küçük olduğunda dikkate alınması gerekir. Çözünen maddelerin güçlü bir şekilde tutulduğu durumlarda, terim yalnızca küçük bir ölçüde değişir ve sonunda çözüm üzerinde göz ardı edilebilir bir etkiye sahiptir.

Laboratuvarda yapılan testler
Biyokimya laboratuvarında yapılan testler
Laboratuvar Testleri
Laboratuvar numuneleri toplama taşıma ve saklama Talimatı
Biyokimya Laboratuvarı
Dış laboratuvar sonuçları ne zaman çıkar
Yeni örnek gönderilmesi uygundur ne demek
15 günde çıkan kan tahlili nedir

Sonuç olarak, iki yakın zirveyi çözmek için elde tutma oranını artırmanın pek bir anlamı yoktur. Benzer şekilde, k ‘1’den küçükse çözünürlük hızla azalır.

Plaka numarası N, daha uzun bir kolon kullanılarak, partikül boyutunu azaltarak veya akış oranını optimize ederek (
Knox arsa). Bununla birlikte, çözünürlük (N) ‘ye bağlı olduğundan, tek başına bununla çözünürlüğü önemli ölçüde artırmak pratik olmayabilir.

Ayrılma Zamanı

Değişik parametrelerin ayırma süresi üzerindeki etkisini gözlemlemek kromatografi için değerlidir, böylece minimum sürede optimum bir ayırma elde edilebilir (ek olarak, bu yaklaşım çözücü tüketimini en aza indirecektir). Son pikin elüe edilmesi için geçen sürenin şu şekilde verildiği gösterilebilir:

t, = 16X RTx [a / (. – l)] X [(1 + k ’) 3 / kr2] X [H / u]

Bu formda denklem, diğer terimler sabitken çözünürlüğün iki katına çıkarılmasının ayırma süresinde dört kat artışa neden olduğunu göstermektedir. Denklem ayrıca k ‘1,26 olduğunda ayırma süresinin en kısa olduğunu, ancak pratik amaçlar için 1.5-5.0 aralığının optimum çözüm süresini verdiğini gösterir.

Karmaşık bir çözünen karışımı için, maksimum k ‘değeri 5 olan tüm bileşenler arasında iyi bir çözünürlük elde etmek genellikle mümkün değildir.

Tipik olarak 10’a kadar k ‘değerleri pratik bir çözüm sunar. Kapasite faktörlerini içeren terim bu denklemde önemli bir rol oynadığından, k ‘değerlerinin yayılması, gradyan elüsyonu veya birleşik sütunlar kullanılarak en aza indirilebilir.

Hazırlayıcı Ayırmalar

Analitik bir ayırmanın ölçeğini büyütmek, belirli bir bileşenin bir çözünen madde karışımından izole edilmesine ve saflaştırılmasına izin verir. Kromatografik koşullar oluştururken dikkatli olunursa, kolon performans parametrelerini düşürmeden hazırlayıcı ayırmalar gerçekleştirilebilir.

Hazırlayıcı HPLC, basitçe, ayrıştırılan bileşenlerin toplandığı herhangi bir kromatografik ayırmayı tanımlar, ancak daha çok, daha yüksek numune yüklemelerinin veya daha büyük sütunların kullanıldığı ayırmaları ifade eder. Hazırlayıcı ölçek ayırmaları için kullanılan sütunlar, boyuta göre sınıflandırılmıştır.

Örneğin, 25 X 0,46 cm’ye kadar olan kolonlar PLC-1 kategorisi olarak sınıflandırılmıştır ve bu grup, ekstra büyük numunelerin (3 mg’a kadar) uygulanabileceği analitik boyutlu kolonları içerir. Analitik cihazlarla hala kullanılabilen biraz daha büyük kolonlar (50 X 0.6-1.0 cm) PLC-2 olarak sınıflandırılmıştır ve ayırmaya bağlı olarak kapasitelerinin 25 mg’a kadar çıkacağı tahmin edilmektedir.

Daha büyük sütunlar, uzun ve dar veya kısa ve geniş olmalarına bağlı olarak PLC-3 ve PLC-4 olarak sınıflandırılır ve tipik olarak 10 g’a kadar miktarları ayırır. Analitik HPLC’de, belirli bir sabit ve hareketli faz, belirli bir akış hızı ve sıcaklığa sahip belirli bir numune için sabit bir plaka numarası (N), alıkoyma (k ‘) ve çözünürlük (R,) verecektir.

Hazırlık amaçları için, basitçe numune konsantrasyonunun arttırılması, sonunda, sütunda kurulan dengeyi bozarak bu parametreler üzerinde ciddi etkilere sahip olacaktır. Mobil faz hızının ve çözünen ağırlığın bir fonksiyonu olarak bir kolonun çözünürlüğünü göstermektedir.

Yükleme artırılarak çözünürlük azaltılır; bu, a ve k ‘değerlerinin azalmasının bir sonucu olarak ortaya çıkar. Örnek tepe noktaları için k ‘değerleri% 10’dan fazla azalma gösterdiğinde, sütunun aşırı yük durumunda olduğu kabul edilir.

Daha yüksek yüklemelerde, akış hızının çözünürlük üzerinde çok az etkisi vardır (akış hızının doğrusal olması ve türbülans oluşmaması koşuluyla). Bu önemli bir gözlemdir çünkü birim zamandaki verimi iyileştirmek için akış hızının artırılabileceği anlamına gelir.

Üretim hızı olarak da adlandırılan bu ikinci faktör, ayırmanın gerçekleştirildiği koşulları optimize ederken önemli bir husustur.

Klasik Knox grafiğinden, aşırı yüklü olmayan bir durumda bant genişlemesine katkıda bulunan kütle transfer teriminin artan akış hızı ile arttığı zaten gösterilmiştir. Sonuç olarak, üretim hızının önemli olduğu hazırlayıcı ayırmalar için, akış hızının çözünürlük üzerindeki etkisi, kütle transferinin etkisinin daha az belirgin olduğu benzer parçacıklar kullanılarak daha da azaltılabilir.

Açıktır ki, daha yüksek basınç gereksinimleri ile bağlantılı pratik problemler nedeniyle partikül boyutundaki küçültmenin bir sınırı vardır. Maksimum yükleme en iyi deneysel olarak belirlenir ve tabii ki gerekli bileşenlerin çözünürlüğüne bağlı olacaktır. Üretim hızı ile temel parametrelere ilişkin denklemler türetilmiştir.

The post Ayrılma Zamanı – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).