Suda çözünen vitaminlerin HPLC analizi, on yıldan fazla bir süredir yaygın olarak kullanılmaktadır ve burada yalnızca daha yeni gelişmeler tartışılacaktır. Alandaki erken gelişmelerin kapsamlı incelemeleri yazılmıştır.

En erken ayırmalar, suda çözünür vitaminlerin daha polar doğasını yansıtan iyon değişim kromatografisi kullanılarak gerçekleştirildi. Bununla birlikte, sülfonik asitler, trifloroasetik asit ve organik olmayan fosfat gibi reaktifler kullanılarak ters fazlı iyon çifti kromatografisinin eklenmesi, önceki yöntemlerin çoğunu iyileştirmiştir.

B1, vitamini

Vitamin B genellikle pirofosfat veya ester formunda bulunur. Analizden önce ester, asit fosfataz ve tek bir tür olarak belirlenen toplam B vitamini içeriği kullanılarak enzimatik olarak karşılık gelen aside dönüştürülebilir.

B vitamininin tam kan, beyin omurilik sıvısı ve süt içindeki kromatografik ayrılması, 0.05 M sodyum sitrat tamponu, pH 4.0-metanol artı 0.01 M sodyum oktan-sülfonat içeren bir mobil faz kullanılarak ters faz iyon çifti kromatografisi ile a ile kombinasyon halinde gerçekleştirilebilir. C’nin sabit fazı, modifiye silikadır.

Bu örnekte, kolon sonrası türevlendirme, tiamini tiyokroma oksitlemek için potasyum ferrisiyanid kullanılarak gerçekleştirildi, bu daha sonra florimetrik olarak tespit edildi (367 nm’de eksitasyon ve 435 nm’de emisyon).

Multivitamin preparatlarında B vitamini tayini, ekstraksiyon zorlukları nedeniyle engellenebilir, ancak sodyum dietil-enepenta-asetikasit kullanımı% 90 oranında geri kazanımı sağlar.

Daha sonra, ters fazlı iyon çifti kromatografisi,% 1 asetik asit-metanol içinde 0.001 M heksansülfonik asitten oluşan bir mobil faz kullanılarak gerçekleştirilebilir.

Bu yöntemi kullanarak tiamin, niasinamid, riboflavin ve piridoksin miktarı belirlenebilir. Tiamin ve türevlerinin ayrıştırılması ve saptanması için bir Lichrosorb-NH, sabit fazın kolon sonrası türetme prosedürü ile kombinasyon halinde kullanıldığı normal faz kromatografisi kullanılmıştır.

Mobil bir asetonitril-90 mM potasyum fosfat fazı kullanılarak, pH 8.4 (60:40), iyi tiyokrom, tiyokrom monofosfat, pirofosfat ve trifosfat ayrımı elde edildi. Tiyokrom türevlerinin karışımları kullanılarak saptamanın hassasiyeti yaklaşık 1 pmol idi.

Shodex OH Pak M-414 normal faz desteği, daha önce açıklanan ferrisiyanür kolon sonrası tespit sistemi kullanılarak tam kandaki tiamin seviyelerini belirlemek için kullanılmıştır. 0.2 M Na, HPO’dan oluşan bir mobil faz ile gerçekleştirilen kromatografiden önce numuneler enzimatik olarak serbest tiamine dönüştürüldü. Analiz için sadece 0.1 ml kan gerekliydi.

Suda çözünen vitaminler hangileridir
Suda ve yağda çözünen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler
Suda çözünen vitaminler hücre zarından geçebilir mı
Suda çözünen vitaminler özellikleri
Suda çözünen vitaminler hücre zarından geçebilir mi
Yağda eriyen vitaminler
Yağda çözünen vitaminler Nelerdir

B2, vitaminler

B vitamininin en yaygın biçimleri, elektron transfer zincirlerinde yer alan bazı enzimlere ko-faktörler (ligandlar) olarak katılımları ile en iyi bilinen riboflavin 5′-fosfat (FMN) ve flavin adenin dinükleotiddir (FAD).

Ligand genellikle enzimlere fosfat yarımı yoluyla bağlanır ve bu nedenle dokudan izolasyon, hafif asit hidrolizi veya bir asit fosfataz ile enzimatik sindirim yoluyla sağlanabilir.

Flavinlerin çözünürlüğü için en popüler kromatografik modlar, ters faz ve normal faz kromatografisidir. Örneğin, hareketli bir kloroform-metanol fazı ile sabit bir silika jel fazı kullanılarak et ekstraktlarında flavinler belirlenebilir.

Kimyasal sentez sırasında oluşan FMN’nin yan ürünlerinin tanımlanması, son zamanlarda bir C, sabit faz ve bir metanol-0.1 M amonyum format, pH 3.7 mobil fazı kullanılarak bir ters faz sisteminin geliştirilmesi ile iyileştirilmiştir.

İlginç bir şekilde, hareketli fazın metanol-5 mM tetrabütilamonyum format, pH 3.5’e değiştirilmesi, mono- ve difosfat formlarının elüsyon sırasının tersine dönmesiyle sonuçlanır.

FMN, DEAE-Sephadex üzerinde kromatografiye tabi tutulabildiğinden, yeni hidrofilik iyon değiştiriciler (TSK DEAE veya Mono Q) bazı avantajlar sunabilir. FMN, geleneksel destekler üzerinde hareketsizleştirilmiş apoflavodoksin kullanılarak afinite kromatografisiyle saflaştırılabilir.

Çeşitli B vitamini türlerinin içsel absorpsiyonu, 280 nm’de UV absorbansını izleyerek saptamayı kolaylaştırır; ancak, daha yaygın olarak floresan saptama kullanılır (450 nm’de eksitasyon ve 520 nm’de emisyon).

B6 vitaminleri

B6 vitamini, suda çözünen vitaminlerin piridin grubunda altı ayrı form olarak bulunur. Yaygın formlar, karşılık gelen fosfat esterleri ve piridoksin formları ile birlikte piridoksal ve piridoksamindir.

Bu bileşikler, çok çeşitli enzim reaksiyonlarında kofaktör olarak işlev görür, ancak en önemlisi, amino asit biyosentetik yollarının transaminasyon reaksiyonunda bulunur. Bu grup vitaminlerin ekstraksiyonu, vitaminler için tarif edilen yöntemlerle aynı yöntemlerle yapılabilir.

Ters faz sistemleri, vitamin B6 grubunun farklı üyelerini ayırmak için kullanılmıştır ve tipik koşullar, asetonitril-sulu fosfat tamponunun hareketli bir fazı ile bir CI8 sabit fazı kullanır.

Diğer popüler yöntemler, iyon değişim kromatografisine dayanır ve piridoksamin, piridoksal, piridoksin ve bunların fosfat esterlerinin tamamen ayrılması bu mod kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Kromatografiyi basitleştirmek ve piridoksal fosfatı spesifik olarak saptamak için bir kolon değiştirme cihazı kullanıldı.

Bu yöntem o zamandan beri kan ve gıda ürünleri de dahil olmak üzere çeşitli kaynaklardan B6 vitamini analiz etmek için kullanılmaktadır. B6 vitaminlerinin tespiti, 210-250 nm’de UV emilimi izlenerek gerçekleştirilebilir.

Alternatif olarak, sırasıyla 310 nm ve 380 nm eksitasyon ve emisyon dalga boylarında piridoksamin fosfat, piridoksin fosfat, piridoksamin ve piridoksin için floresan saptama kullanılabilir.

Piridoksal ve piridoksal fosfat, başlangıçta mobil fazda semikarbazidin dahil edilmesiyle oksim türevlerine dönüştürülürlerse, floresan saptama (280 nm’de eksitasyon ve 487 nm’de emisyon) kullanılarak da saptanabilir.

Folik Asit

Folik asit, bir dizi biyosentetik yolda 2-karbon gruplarının transferinde işlev gören, birleşik pterinlerin karmaşık bir karışımının ana bileşiğidir. Folatlar özellikle ısı, UV ışığı veya aside maruz kalma ile oksidasyona karşı hassastır.

Folatların iyon değişimiyle ayrılması, pelliküler desteklerde bildirilmiştir, ancak bu çalışmalara doğal olarak oluşan folatların yalnızca birkaçı dahil edilmiştir.

Tüm bunların analizine izin veren bir yöntem tanımlanmıştır.Doku özlerinde folik asit formları. Poli-glutamat formları, daha sonra Dowex 50 X-4 üzerinde iyon değişim kromatografisine tabi tutulan monoglutamat türevlerini üretmek için sıçan karaciğer konjugazı ile enzimatik olarak hidrolize edildi.

The post Suda Çözünen Vitaminler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).