Solütlerin ayrıştırıldığı çok küçük hacim, ekstra kolon seyrelmesini ve bant genişlemesini önlemek için ekstra kolon hacimlerinin azaltılmasını gerektirir. Bu, akış hücresinin hacminin geleneksel 5 pm partikül boyutu kolonları ile kullanılandan daha az olması gerektiği ve dolayısıyla kütle tespit edilebilirliğinde bir kayba neden olması gerektiği anlamına gelir.

8 cm X 0.62 cm ID boyutlarına sahip geniş delikli 3 pm partikül boyutu kolonlarının yakın zamanda geliştirilmesinin, dar elüsyon bantları ile ilgili sorunları azalttığı bildirilmiştir ve kolon ölü hacminin sağlanması, hesaplanabilir. 5 pm partikül büyüklüğünde bir kolon ile aynı, bant hacmi benzer olacaktır.

Bu nedenle, enjeksiyon valfi ve detektör arasındaki ölü hacimlerin en aza indirilmesi koşuluyla, geleneksel akış hücreleri (8 ul) ile iyi bir performans elde edilebilir.

Yüksek akış hızlarında termal gradyanların oluşturulması da bant genişlemesine neden olabilir ve 3 pm partikül boyutu kolonları için büyük bir sorun olmaya devam etmektedir. Bildirilen bir çözüm, enjeksiyon valfini ve sütunu farklı sıcaklıklarda tutmaktır; bununla birlikte, özgül sıcaklık farkı mobil faz akış hızına bağlı olacağından, sistem kolayca kurulamaz.

Hava termostatlı geniş çaplı (8 X 0.62 cm), 3 pm partikül büyüklüğündeki kolonların, 10 ml / dk’dan daha düşük akış hızlarında termal gradyanlar nedeniyle yalnızca çok küçük etkiler yaşadığı bildirilmiştir. Bununla birlikte, genel olarak, geleneksel geometrinin 3 pm parçacık boyutu kolonlarında, termal gradyanlar büyük bir problemdir.

Sütun plakalarının (N) sayısı, k’nin etkilenmeden kaldığı koşullar altında bile büyük ölçüde azaltılabilir. Yakın zamanda yapılan bir teorik tedavi, bant genişliğinde% 10’luk bir artış (ve N’de% 20’lik bir azalma) için numune kütlesi M &’nin şu şekilde öngörülebilir olduğu sonucuna varmıştır:

MA: = 2 [(1 + k ’) / k’] ‘W, / N

Burada, tüm numune kütlesi için kapasite faktörü, N, plaka numarasıdır ve W, doygunlukta bir sütun tarafından alınan bir numunenin ağırlığıdır. Bu nedenle, N’nin daha büyük olacağı daha küçük parçacık sütunlarında, bunun daha küçük olacağı açıktır.

Polimer Nedir
Polimer Kimyası PDF
Polimer maddeler
Polimer örnekleri
Polimerler
Kondenzasyon polimerizasyonu
Polimer çeşitleri
Monomer nedir

Bu nedenle, 3 pm’lik bir partikül boyutu kolonuna yüklenebilen numune kütlesi, 5 pm’lik bir partikül ebadı kolonununkinden daha azdır. 8 x 0.62 cm geniş çaplı bir kolon, aynı uzunluktaki 0.46 cm çaplı bir kolonun hacminden 1.8 kat daha büyük bir hacme sahiptir, bu da daha sabit faz, daha büyük bir W bileşeni ve dolayısıyla geliştirilmiş Mi: ile sonuçlanır. Ayrıca, 3 pm parçacık boyutu sütunlarının azaltılmış kütle yüklenebilirliğinin, algılama sınırlarında sorunlara neden olabileceği de kabul edilmelidir.

Tüm mikropartikülat kolonlarında ortak bir problem, partiküllerle tıkanma problemidir ve 5 pm partikül boyutu kolonları ile alınan tedbir prosedürleri, 3 pm partikül boyutu kolonları ile daha da önemli hale gelir.

Bu nedenle, mobil faz ve numuneler filtrelenmelidir (0,32-0,5 pm gözenek boyutu), filtreler de pompa ile enjektör arasında sıralı olarak bulunmalı ve analitik kolondan önce bir koruyucu kolon yerleştirilmelidir. Bu önlemlerin takip edilmesi koşuluyla, 3 pm partikül boyutu kolonları, 5 pm partikül boyutu kolonlarından biraz daha fazla soruna neden olmalıdır.

Parçacık Boyutu ve Şeklinin Diğer Yönleri

Geleneksel tekniklerle paketlenmiş kolonlar için genel olarak, aynı büyüklükteki partiküller için yaklaşık olarak eşdeğer plaka sayılarının küresel ve düzensiz partiküllerle elde edildiği, ancak küresel partikül kolonlarının geçirgenliğinin düzensiz partikül kolonlarının neredeyse iki katı olduğu bulunmuştur.

Bununla birlikte, dikkatli paketleme teknikleri kullanılarak, hem düzensiz hem de küresel parçacık kolonları için eşdeğer geçirgenlikler rapor edilmiştir. Ticari olarak temin edilebilen neredeyse tüm kolon paketleri küresel olduğundan, kolon teknolojisinin bu yönü daha fazla dikkate alınmayacaktır.

Ticari olarak temin edilen bir kolon paketleme materyalindeki partikül boyutu dağılımı sorunu, kendi kolonlarını paketleyen kromatografi yapan kişi için problemler yaratabilir. Kolon boyunca hareketli fazın akış hızı optimum değerlerde tutulursa, büyük bir partikül boyutu dağılımının kolon verimliliği üzerinde hiçbir etkisi yoktur.

Daha yüksek akış hızlarında, kolon verimliliği üzerinde küçük bir olumsuz etki olurken, tüm elüsyon hızlarında geniş bir partikül boyutu dağılımı, kolon geri basıncını ve ayırma empedansını arttırır. Bu nedenle, maksimum etkili bir kromatografik sistem için partikül boyutu dağılımı en aza indirilmelidir.

Gözenek Büyüklüğü

Boyut dışlama etkileri, tüm sıvı kromatografi türlerinde kromatografik parametrelerin ölçümünü etkileyebilir. Büyük numune moleküllerinin giremeyeceği kadar küçük olan ve mobil faz ile dolu olan sabit fazda gözeneklerin varlığı nedeniyle boyut dışlama etkileri meydana gelir.

Hareketli ve sabit fazlar arasındaki denge hızı numune moleküllerinin gözeneklere difüzyon hızına bağlı olduğundan, kolonun verimliliği bu etkilerden açıkça etkilenir.

Durağan fazı oluşturan partiküllere bağlı alkil zincirinin uzunluğu arttıkça, kısıtlı erişim nedeniyle gözeneklere yayılma oranı azalır. Bu nedenle, numune moleküllerinin sabit faza erişiminin boyut dışlama etkileri ortaya çıkmadan maksimize edildiği optimum bir durumun elde edilmesi gerektiği açıktır.

Boyut dışlama etkileri ile ilgili problemler, bir araya gelme eğilimi olan protein ve nükleik asit makromolekülleri ile özellikle önemli hale gelir, bu nedenle sadece boyut dışlama etkilerine değil, aynı zamanda sütunların tıkanmasına da neden olur. Aşırı durumlarda, gözenek çapları en az 50 nm olan sabit fazlar gereklidir.

Ev yapımı kolon ambalajları

Kimyasal olarak bağlı polimer fazlar

HPLC için uygun kimyasal olarak bağlanmış polimer fazlarının üretimi için ticari olarak başarılı yöntemler geniş çapta ilan edilmemiştir ve sadece genel terimlerle belirtilebilir. Bununla birlikte, üretimleri için iki temel yöntem vardır.

İlk olarak, önceden oluşturulmuş bir desteğin modifikasyonu, uygun yerlerin mevcut olması koşuluyla mümkündür. Alternatif olarak, polistiren tipi desteklerde popüler olduğu kanıtlanmış bir yöntem, uygun monomer birimlerinin ko-polimerizasyonu ile gerekli desteği hazırlamaktır.

The post Polimer Fazlar – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).