Monoaminlerin dokuz farklı metabolik türevinin ayrılması ve kantitasyonu, 0.07 M sodyum fosfattan oluşan bir mobil faz artı 0.1 mM EDTA-metanol (9: 1), pH 5.4, bir ODS durağan faz kullanılarak da tarif edilmiştir. Ters fazlı bir kromatografi kolonunun etkinliği ile güçlü bir asidik katyon-değişim kolonunun etkinliği arasında doğrudan bir karşılaştırma yapılmıştır.

Yazarlar, ODS sütunu daha yüksek sayıda teorik plaka sunarken, bazı katekolamin piklerini solvent cephesinden ayırmanın genellikle zor olduğu ve ayrıca bazı durumlarda yabancı bileşenlerden belirli piklerin çözülemediği sonucuna varmışlardır; bu nedenlerden dolayı yazarlar katyon değişim sütununu tercih etmişlerdir.

Ters fazlı kromatografi ile bir iyon çifti ters faz modunda organik asitlerin kullanımı arasındaki fark biraz zayıf bir şekilde tanımlanmıştır ve bu nedenle biyojenik aminlerin ayrılmasında iyon çifti kromatografisinin kullanımı düşünüldüğünde tartışma aşağıdakilerle sınırlı kalacaktır.

Bu teknik başlangıçta Knox ve meslektaşları tarafından tanıtıldı ve metanol-suyun mobil fazı düşük konsantrasyonda sodyum dodesil sülfonat içerdiğinde, katekolaminlerin ve metabolitlerinin iyi bir tutma, verimlilik ve pik simetri ile ayrıldığını gösterdi.

Bu çalışmalardaki sabit faz, aksi takdirde ayırma verimini azaltabilecek herhangi bir serbest silanol grubu ile reaksiyona girmek için trimetilsilan ile daha fazla muamele edilmiş olan ODS idi.

Şu anda, biyojenik aminlerin iyon çifti kromatografisinde kullanılan en popüler sabit faz ODS’dir ve özel olarak hazırlanmış iyon çifti kolonları, serbest silanollerin sayısının azaltıldığı artık ticari olarak mevcuttur.

ODS durağan fazları genellikle sitrat veya fosfat tamponunun (pH 2-5) mobil fazıyla, çoğunlukla organik bir modifiye edici (metanol veya asetonitril) ve 0.1 ila 20 mM arasındaki konsantrasyonlarda bir karşı iyon ile kullanılır.

Yaygın olarak kullanılan karşı iyonlar arasında sodyum dodesil sülfonat, sodyum oktil sülfonat, sodyum lauril sülfat ve sodyum heptan sülfonat bulunur. Katekolaminler ve metabolitleri için ters fazlı iyon çifti kromatografisinin çözme gücünün bir örneği, 15 farklı bileşiğin iyi bir ayrımının gösterildiği gösterilmektedir. Ancak yazarlar, mobil fazda sodyum oktil sülfat varlığının sütunların ömrünü kısalttığını belirtmişlerdir.

Monoaminler nedir
Monoaminler Nelerdir
Monoamin nörotransmitter
Monoamin oksidaz A
Monoaminerjik sistem nedir
MAO-B inhibitörleri
Monoamin nedir
İndolamin nedir

İyon çifti kromatografisiyle yakından ilgili bir kromatografik teknik, orijinal olarak Schill tarafından tarif edildiği gibi iyon çifti ters fazlı bölüm kromatografisidir. Bu teknik, noradrenalin, adrenalin ve dopamin dahil organik amonyum bileşiklerinin ayrılması için kullanılmıştır.

Açıklanan ayırmalarda, bir ters faz sütunu (ya oktil ya da OD’ler), hareketli bir faz olarak bir fosfat tamponu ile kullanılan bir sıvı sabit faz oluşturmak için bir organik çözücü (ya metilen klorür ya da 1-pentanol) ile kaplanmıştır.

Dihidrojen fosfat, sikloheksil-sülfamat, disikloheksilsülfamat ve oktil sülfat dahil olmak üzere bir dizi bileşik karşı iyon olarak kullanıldı.

Yüksek oranda hidrofilik noradrenalin ve adrenalini ayırmak için sabit bir metilen klorür fazının gerekli olduğu, hidrofilik aminlerin ve kuaterner amonyum bileşiklerinin kromatografisinde pik asimetriyi önlemek için bir karşı iyon olarak uzun zincirli bir alkilamonyum bileşiğinin gerekli olduğu kaydedildi.

Oktil bağlı destek üzerindeki elüsyon sırasının, bir organik faz ve bir sulu faz arasındaki iyon çifti dağılımı için normal davranışa uygun olduğu, oysa ODS durağan fazda kolonun belirli hidrokarbonlu özellikleri koruduğu ve bunun sonucunda bir azalmaya neden olduğu kaydedildi. 

Katyon değişimli HPLC, katekolaminlerin ayrılması için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bileşiklerin elüsyon sırası, tamponun iyonik kuvvetinde ve pH’ında taşıdıkları yüke bağlıdır.

Bu teknik, bu kimyasal varlık serisi için optimal görünürken, mevcut katyon değişim kolonlarının nispeten düşük verimlilikleri nedeniyle ayırmalarda problemler ortaya çıkmaktadır. Ayrıca, yakın zamana kadar ticari olarak temin edilebilen sütunların kalitesi oldukça değişkendi.

Bununla birlikte, katekolaminlerin bir dizi ayrılması, katyon değiştirme kromatografisi kullanılarak bildirilmiştir. Daha yakın zamanlarda, katekolaminlerin hem glisilglisin türevlerinin hem de 2-siyanoasetamid türevlerinin ayrılması, katyon değişimli HPLC kullanılarak gösterilmiştir.

Biyojenik aminlerin ayrılmasında katyon değişim HPLC potansiyelinin bir örneği Şekil 11.7.2’de gösterilmektedir. Gösterilen ayırmada, sabit faz, Vydac-CX pelliküler katyon değiştirici ile kuru paketlenmiş bir cam kolondan (500 X 2 mm) oluşuyordu.

Tespit Etme

Biyojenik aminlerin kantitasyonu için birkaç farklı detektör tipi kullanılmıştır; ancak şu anda en popüler teknikler elektrokimyasal saptama ve floresan saptamadır ve genellikle sütun öncesi veya sonrası türetme teknikleriyle birleştirilir.

Bu saptama tekniklerinin spesifik ayrıntıları başka bir yerde tartışılmıştır ve bu bölümde yalnızca biyojenik aminlere uygulanan temel ilkeler, ilgili avantajları ve dezavantajları açısından iki teknik arasındaki bir karşılaştırma ile birlikte gözden geçirilecektir.

Biyojenik aminlerin elektrokimyasal tespiti, bileşikten detektör elektroduna giden iki elektron kaybına dayanır ve böylece tespit mekanizması için temel sağlar. Böylece serotonin gibi 5-hidroksiindoller karşılık gelen imin-kinona dönüştürülürken katekolaminler kinonlara oksitlenir.

Elektron soyutlamasından türetilen akım, çözelti içindeki bileşiğin konsantrasyonu ile orantılıdır. Biyojenik aminlerin ölçümünde iki tip elektrokimyasal dedektör kullanılmıştır: en yaygın olan amperometrik dedektörler temelde tahribatsızdır, bileşiğin yaklaşık% 1-5’ini oksitlerken, alternatif kulometrik dedektörler% 100’e ulaşmaya çalışır. 

Beyin dokusunda katekolaminlerin saptanması için HPLC ile kombinasyon halinde elektrokimyasal saptamanın uygulanmaya başlanmasından bu yana, kromatografik literatür, kromatografik yöntemlerde veya ekstraksiyon prosedürlerinde yapılan değişiklikleri açıklayan bir dizi makale ile incelendi.

Bu literatürdeki daha önemli makaleler arasında Keller ve diğerleri, Felice ve diğerleri, Moyer ve Jiang ve Taylor ve diğerleri bulunmaktadır. Katekolaminlerin metabolitlerinin belirlenmesinde elektrokimyasal tespit de kullanılmıştır. Biyojenik aminlerin amperometrik tespiti için kullanılan spesifik elektrokimyasal koşullar, tespit edilen spesifik bileşiğe göre değişir.

Bu nedenle, katekolaminler ve 3,4-dihidroksifenilasetik asit genellikle bir Ag-AgC1 referans elektroduna karşı +0.60 V’luk bir elektrot potansiyeli ile ölçülürken, serotonin için 5 hidroksiindoleasetik asit, 3,4-dihidroksifenilasetik asit, 3-metoksi -4-hydroxyphenylglycoland homovanillic asit bir uygulamalı + OM V potansiyeli kullanılır.

The post Monoaminler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).