Plazma ve idrardaki kortikosteroid konsantrasyonu adrenal fonksiyonun bir göstergesidir ve bu nedenle doğru ölçümleri büyük klinik öneme sahiptir.

Geçtiğimiz on yıl boyunca, klinik laboratuarların HPLC tekniklerini kullanarak kortikosteroid konsantrasyonlarını belirlemesi için artan bir eğilim olmuştur. Bu belirlemelerde kullanılan en popüler kromatografik modlar, silika üzerinde sıvı-katı kromatografisini ve ters fazlı kromatografiyi içerir.

Kortikosteroidlerin ilk sıvı-katı ayrılması, kortizol, kortizon ve ll-deoksikortizolün ayrılması için bir mobil kloroform-dioksan fazı ile bir silika sabit faz kullanılarak gerçekleştirildi.

Silika sabit fazları kullanan çoğu ayırmada, başlangıçta Hesse ve Hovermann tarafından tanımlanan mobil fazın varyasyonları kullanılmıştır. Bu nedenle, diklorometan-etanol-su mobil fazı, prednizolon, kortizol, prednizon, kortizon, kortikosteron, deoksikortizol ve 17-a-hidroksi-progesteronon bir silika sabit fazı çözmek için kullanılmıştır.

Kullanılan diğer mobil fazlar şunları içerir: plazma prednizolon tayini için heksan-metilen klorür-etanol-asetik asit, idrarda kortizol ölçümü için kloro-formda% 1,5 metanol ve% 0,2 su karışımı. diklorometan-heksan-eihanol-asetik asit fazı kortizol ve metilprednizolonun ayrılması için kullanılmıştır.

Kortikosteron, kortizon ve kortizolün ayrılması için bir silika sabit fazı ve bir mobil diklorometan-metanol fazı içeren bir mikro-delikli HPLC kolonu kullanılmıştır.

ODS sabit fazlı ters fazlı HPLC kullanan birkaç izokratik sistem tarif edilmiştir; bunlar, plazma kortizol ve ll-deoksikortizol konsantrasyonlarının belirlenmesinde kullanılan metanol-su karışımlarını ve 20- ve 20 / 3-, 5a ve 5 / ‘yi ayırmak için kullanılan bir asetonitril-su karışımını içerir. 

Kortikosteroid ne demek
Kortikosteroid krem
kortikosteroid nedir, ne ise yarar
Steroid içeren ilaçlar hangileri
Kortikosteroid pdf
Topikal kortikosteroid ilaç
İnhaler kortikosteroid
Kortikosteroid kullanıcıların yaptığı diğer aramalar

Plazma kortizol konsantrasyonlarının ölçümü için, aside bağlı flüoresanı izleyen bir saptama sistemi ile birleştirilmiş su-asetonitril-tetra-hidrofuran-1 Mfosfat tamponu, pH4.4’ün hareketli bir fazını kullanan izokratik bir sistem tarif edilmiştir.

Kortikosteroidlerin ve polar metabolitlerinin ayrılması gerektiğinde, ters fazlı HPLC kullanan bir gradyan sistemi tarif edildi.

Sabit faz ODS idi ve metanol-0.01 M amonyum asetat, pH 6.9’un ilk mobil fazı ve% 100 metanolün son mobil fazı ile birlikte, kortizol ve glukuronidler dahil olmak üzere bir dizi kortizolden türetilmiş metabolitin ayrıştırılması mümkün olmuştur. 

Benzer şekilde, metanol-su (% 40-100 metanol) üslü gradyanlı bir ODS durağan faz kullanılarak, bilinen kortikosteroidlerin ve metabolitlerinin çoğunun bir çözünürlüğü elde edildi.

Kortikosteroidlerin ayrılmasında kullanılan diğer kromatografi modları şunları içerir:

• (a) Plazmadaki kortizolün belirlenmesinde kullanılan diklorometan-2-propanol-su mobil fazı ile bir nitril sabit faz kullanarak normal faz kromatografisi
• (b) Kortizolün plazma veya idrardan saflaştırılması ve kantitasyonu için yüksek performanslı sıvı afinite kromatografisi; burada sabit faz, bir silis desteğine kovalent olarak bağlanan bir anti-kortizol antikorundan oluşur. Kortizol, sabit faza bağlandıktan sonra, yüksek iyonik güçlü bir tamponla tersine çevrilebilir.

Kortikosteroidlerin tespiti, maksimum 240 nm civarında olan karakteristik 4-ene-3-on rezonans yapılarının kuvvetli aborbansı ile kolaylaştırılır.

240 nm’de kortikosteroidlerin alt saptama sınırı yaklaşık 2-5 ng’dir; bununla birlikte, 254 nm’lik bir kesme dalgaboyuna sahip bir filtreye sahip sabit bir dalga boyu detektörü kullanıldığında, saptama sınırı, yaklaşık 10 ng’ye yükseltilir.

Kortikosteroidlerin asitle indüklenen floresansı, serumdaki kortizol için tespit limitini arttırmak için kullanılmıştır. Sırasıyla 366 nm ve 488 nm eksitasyon ve emisyon dalga boyları ile birlikte kromatografiden önce pH 4.4’te bir mobil faz tamponu ve steroidin etanolik sülfunk asit içinde inkübasyonu kullanılarak, tespit limiti 500 pg’ye düşürülür.

Kortikosteroidlerin floresan tespitini kolaylaştırmak için çeşitli türetme prosedürleri de mevcuttur ve bunlardan bazıları dansilhidrazin, glisinamid ve benzamidin kullanımını içerir.

Progestinler

Bu steroid hormon grubu, kortikosteroidlerde bulunan aynı A4-3-keto gruplaması ile karakterize edilir ve genel olarak bu sınıf bileşikler için tarif edilen saptama yöntemleri progestinlere uygulanabilir.

Progestinlerin HPLC ile analizi mükemmel bir şekilde gözden geçirilmiştir ve çeşitli ayırma tekniklerinin tümünün ayrıntıları için ilgilenen okuyucu bu metne başvurmaktadır. Gebelerin çözünürlüğü için kullanılan kromatografik ayırmaların çoğu, normal faz ve ters faz kromatografisi kullanmıştır.

Pregnane serisinin 3 diyonu (progesteron dahil) ve 6-monohidroksimonoketonun (pregnenolon dahil) ayrıştırılmasında modifiye edilmemiş bir silika sabit faz ve bir mobil faz etanol-di-klorometan kullanılarak normal faz kromatografisi kullanıldı.

Aynı sabit fazı kullanarak, ancak mobil bir n-heksan-metanol-etanol fazıyla, C20’de epimerik olan iki çift pregnan türevi başarıyla çözüldü (yazarlar ters faz kromatografisinin daha iyi çözünürlük verdiğini belirtmiş olsa da).

Ayrılan çiftler arasında 20a ve 20P-hidroksi-4-pregnan-3-onaend ve ayrıca 5-pregnan-3 & 20a-diol ve 5-pregnan-3fl-2OP-diol vardı. Aynı yazarlar, As steroidlerinin 5a analoglarından ayrıştırılmasının en iyi, asetonitril-su mobil fazı ile bir ODS durağan faz kullanılarak ters faz HPLC ile gerçekleştirildiğini bildirdiler.

4epimerik pregnandiol çiftlerinin benzer ayrımları, hareketli bir etanol-su fazı ile ODS sabit fazlar kullanılarak rapor edilmiştir. Aynı yazarlar, bir Chromegabond diol kolonu (karbon omurgası üzerinde cis hidroksil grupları olan glikofaz tipi ürün) ve bir içbükey gradyan içeren bir mobil faz ile normal faz tekniği kullanılarak progesteronun ana metabolitlerinden ayrıldığı bildirilmiştir. 

Özet olarak, en karmaşık steroid karışımlarının bile etkili bir çözünürlüğü, normal ve ters fazlı kromatografinin bir kombinasyonu kullanılarak elde edilebilir.

Androstanlar

Androstanların ayrılması için hem ters faz hem de normal faz kromatografisi kullanılmıştır. Genelde, durağan faz olarak modifiye edilmemiş silikanın kullanıldığı normal faz kromatografisi, epimerler hariç tüm epimerik steroidlerin daha iyi çözünürlüğü elde edilebildiği için tercih edilen ayırma modudur.

Bir androjen karışımını çözmek için normal faz kromatografisinin kullanımına bir örnek gösterilmektedir. Testosteron ve androstanedionun monohidroksi metabolitlerinin epimerlerinin rezolüsyonu, bir silika sabit fazlı heksan-tetrahidrofuran-2-propanolün mobil fazı kullanılarak sağlanmıştır.

Ters fazlı HPLC’nin androstanları çözme yeteneği bir şekilde sınırlıdır ve genellikle makul bir ayırma elde etmek için birden fazla izokratik mobil fazın veya bir gradyan sisteminin kullanılması gerekir.

The post Kortikosteroih – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).