Floresan antikor testlerinde olduğu gibi, EIA’lardaki antikor, bir antijen-antikor reaksiyonu gerçekleştiğinde tespit edilebilen bir işaretleyici ile birleştirilir. EIA’larda markör bir enzim, tipik olarak alkalin fosfataz peroksidazdır.

Bu enzimler, renksiz bir substratın renkli bir son ürüne parçalanmasını katalize eder. Anti-gen ve enzime bağlı antikorun bağlanmasını görselleştirmek için, enzim için uygun substrat eklenmelidir. Pozitif bir reaksiyon, görsel olarak tespit edilebilen veya bir spektrofotometrede kantitatif olarak ölçülebilen renkli bir son ürünün üretilmesiyle sonuçlanır.

ÇED testi için iki temel format kullanılmaktadır. Birincisinde, aranan antijene özgü monoklonal antikor, bir mikrotitre tepsisinin plastik tüpleri, boncukları veya oyukları gibi katı bir yüzeye bağlanır. Klinik numune bu katı yüzeye eklenir, ardından inkübasyon ve yıkama adımları takip eder.

Antijen numunede mevcutsa, antikora bağlanır ve bağlanmamış materyal yıkanır. Şimdi, enzim etiketli antikor, antijen-antikor kompleksini saptamak için eklenir. Bu adım, doğrudan veya dolaylı bir şekilde gerçekleştirilir.

Direkt yöntemde, enzime konjuge olan ikinci antikor, katı yüzey üzerinde birinci antikor tarafından bağlanan anti-gen ile reaksiyona girer. Dolaylı yöntemde, reaksiyonu geliştirmek için iki ek antikora ihtiyaç vardır. Birincisi, bağlı antijene özgü etiketlenmemiş antikordur ve ikincisi, birinci antikorla reaksiyona giren enzim etiketli bir antikordur.

Enzim immunoassay nedir
Enzim immunoassay yöntemi nedir
Kemilüminesans immunoassay
Kemiluminesans immunoassay nedir
İmmunoassay cihazı
İmmunoassay yöntemi nedir
İmmunoassay nedir
İmmunolojik yöntemler konuları

Bu şekilde dolaylı ÇED, IFA testine benzer. Son olarak, her iki test yönteminde de enzim için substrat eklenir. Geliştirilen renkli son ürün miktarı, klinik numunede bulunan antijen miktarını gösterir. Doğrudan ve dolaylı ÇED yöntemlerini göstermektedir.

Belirli parazitleri, rotavirüsü ve diğer enterik virüsleri ve diyare patojenlerinin toksinlerini tespit etmek için EIA kitleri bu formatta mevcuttur. Renk plakası, böyle bir kiti göstermektedir.

Bir lateks reaksiyonunun şeması. (a) Bir antikorla kaplanmış lateks partikülleri (örneğin, grup A Streptococcus antikoru) spesifik bir antijenle (grup A Streptococcus antijen) reaksiyona girdiğinde, partiküller test slaytı üzerinde aglütine olan kümeler oluşturmak için birleşir (sol alt köşe (a)).

Her zaman aynı slayt üzerinde paralel olarak yürütülen kontrol testinde, aynı antijen, antikorla kaplı olmayan lateks partikülleri ile karıştırılır, bu nedenle partiküller süspansiyon içinde kalır ve aglütine olmaz.

Şema (b) ‘de, antikor kaplı partiküller spesifik olmayan antijenle reaksiyona girmez (örneğin, grup B Streptococcus antijen), bu nedenle hiçbir kümelenme oluşmaz ve test ve kontrol süspansiyonu aglütinasyon göstermez (daha düşük (b) ‘nin sol köşesi).

EIA testlerini gerçekleştirmek için başka bir formatta, spesifik enzim etiketli antikor, gözenekli bir nitroselüloz veya naylon membrana bağlanır. Membran, sıvı klinik numunenin eklenebileceği küçük bir bölmeye sahip tek kullanımlık bir plastik kaset içinde bulunur.

Membranın alt tarafındaki emici bir malzeme, sıvı numuneyi membrandan çekmeye yarar. Numunede antijen varsa, materyal membrandan geçerken membrana bağlı antikora bağlanacaktır. Renksiz substrat ilave edildikten ve membran filtreden geçirildikten sonra, renkli bir alan oluşumu pozitif bir testi gösterir.

Membrana bağlı ÇED testleri çok popülerdir çünkü gerçekleştirilmeleri kolaydır ve güvenilir sonuçlar genellikle 5 ila 10 dakika içinde alınabilir. Bazı bakteri ve virüslerin doğrudan numune tespiti için mevcutturlar.

Nükleik Asit Tespit Testleri

Genler, tüm yaşam biçimleri için genetik mesajı (genotip) içerir. Genotipin ifadesi, her bir yaşamı özel ve benzersiz kılan fiziksel özelliklerin (fenotip) üretilmesiyle sonuçlanır. Tüm genler, DNA veya RNA’dan oluşan nükleik asitlerden oluşur.

Son yıllarda moleküler biyologlar, bu nükleik asit moleküllerinde adenin, timin, sitozin ve guanin (veya RNA’daki urasil) nükleotidlerinin meydana gelme sırasını veya sırasını belirleyebildiler. Dizileme, çeşitli mikroorganizmalar ve hatta insanlar da dahil olmak üzere birçok yaşam formunun tüm gen setini (yani genomu) ortaya çıkardı.

Bilim adamları, çeşitli yaşam formları arasındaki genlerin nükleotid dizisini karşılaştırarak, nükleik asitlerin ortak bölgelerini belirleyebilirler, ancak daha da önemlisi, bir yaşam biçimini özel ve benzersiz kılan farklı nükleotid dizilerini belirleyebilirler.

Bu bilgi ve nükleotid baz adenininin her zaman timine (DNA’da) veya urasile (RNA’da) bağlandığı ve guaninin her zaman sitozine bağlandığı anlayışıyla, laboratuvarda tek sarmallı bir dizi sentezlemek mümkündür. belirli bir yaşam formundaki benzersiz bir gen dizisini tamamlayan, primer olarak bilinen nükleotidler.

Tamamlayıcı baz sekanslarına sahip iki tek nükleik asit ipliği çözelti içinde bir araya getirildiğinde, her bir ipliğin nükleotid baz çiftleri, dubleks veya hibrit adı verilen çift iplikli bir molekül oluşturmak için birbirine bağlanır. Kleik asit saptama yöntemleri: prob deneyleri ve amplifikasyon deneyleridir.

Az önce açıklanan antijen saptama deneyleri gibi, bu nükleik asit saptama gibi, birçok klinik mikrobiyoloji laboratuarında, bir mikroorganizmanın kimliğini doğrulamak veya bir klinik numunedeki varlığını doğrudan saptamak için ortak kullanıma sunulmuştur. Prob ve amplifikasyon testlerinin temel prensipleri burada gözden geçirilmektedir.

Prob Tahlilleri

Bir prob hibridizasyon analizinde, prob olarak bilinen bir nükleik asit ipliği, birleşeceği hedef olan tamamlayıcı bir nükleik asit ipliği arayacaktır. Klinik bir numunede veya kültürde izole edilmiştir.

Antijen saptama deneyleri gibi, hibridizasyon reaksiyonunun gerçekleşip gerçekleşmediğini belirlemek için proba bir işaretçi veya raportör molekül eklenmelidir.

Daha popüler haberci moleküller arasında 32P veya 125I; alkalin fosfataz veya yaban turpu peroksidazının enzim konjugatları; ve akridinyum gibi kemilüminesan moleküllerdir.

Kimyasal ışıldayan haberci moleküller, lüminometre adı verilen özel bir alet kullanılarak ölçülebilen ışık yayarlar. Saptanan haberci molekül miktarı, meydana gelen hibridizasyon miktarı ile doğru orantılıdır.

Pozitif bir hibridizasyon reaksiyonu, bilinmeyen hedefin, prob kaynağı olarak görev yapan organizma ile aynı olduğunu gösterir. Hibridizasyon saptanmazsa, numunede hedef organizma mevcut değildir.

The post Enzim İmmünoassay – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).