Renkli FRP’ler normalde aşağıdaki yöntemlerden biriyle üretilir:

1. Metal çökeltme.
2. Azo boya.
3. Tetrazolyum tuzu.
4. Indigogenic yöntem.

Diğer yöntemler şunları içerir:

5. Kahverengi bir pigment oluşturmak için 3,3-diaminobenzidinin (DAB) sitokrom oksidaz veya peroksidazlarla oksidasyonu.
6. İyotlu mavi / siyah renkli bir polisakkarit üretmek için glikojenin fosforilaz tarafından metabolizması.

Metal Çökeltme Yöntemleri

Fosfatazları tanımlamak için rutin olarak metal çökeltme yöntemleri kullanılır, örn. asit fosfataz, alkalin fosfataz ve adenozin trifosfataz.

Substrattan fosfat iyonlarının salınmasına dayanırlar ve daha sonra çözelti içindeki kurşun veya kalsiyum tuzları ile reaksiyona girerler (yakalama ajanı), kurşun veya kalsiyum fosfatın çözünmeyen FRP’sini oluşturmak içindir.

Kurşun fosfat renksizdir ancak kurşun sülfit oluşturmak için amonyum sülfit çözeltisi ile kararır. Kalsiyum fosfat, alkali pH’ta çözünmez ve siyah kobalt sülfit oluşturmak için amonyum sülfit ile işlemden geçirilmeden önce kobalt klorür çözeltisi ile kobalt fosfata dönüştürülmesi gerekir. Bu yöntemlerin her ikisi de zamanla solma eğilimindedir, ancak amonyum sülfür ile yeniden renklendirilebilir.

Substrat asetil tiyokolin kullanan asetil kolinesteraz yöntemi, kahverengi bakır ferrosiyanür oluşturmak için sırasıyla bakır sülfat ve potasyum ferrisiyanür ile reaksiyona giren bir tiyokolin PRP’si üreten bir metal çökeltme yöntemi olarak kabul edilebilir.

Hidrometalurjik yöntemler
Ağır metal tuzları ile çöktürme deneyi
Liç sonrası metal elde etme yöntemleri
Hidrometalurjik bakır üretimi
Hidrometalurjik prosesler
Bakır çöktürme
Hidrometalurjik proses üretim kademeleri
Liç Nedir

Azo Boya Yöntemleri

Azo boya yöntemleri, asit ve alkalin fosfatazları, spesifik olmayan esterazı ve kloroasetat esterazı tanımlamak için kullanılır. Farklı substratlar, yukarıdaki enzimlerden biri tarafından ayrılabilen bir naftol grubu içerir. Renkli bir çözünmez azo boyası oluşturmak için naftol grubu ile reaksiyona giren çeşitli diazonyum tuzları veya yeni heksazotize edilmiş pararosanilin kullanılır.

Tipik olarak, kullanılan diazonyum tuzları arasında hızlı bir şekilde monte edilmesi gereken Fast Red TR, Fast Blue RR, Fast Blue B ve Fast Garnet GBC bulunur. Heksazotize edilmiş pararosanilinden oluşturulan azo boya, ışık mikroskobunda optik lokalizasyonu geliştiren sentetik bir reçineye monte edilebildiği için tercih edilen yöntemdir. Diazonyum tuzları, eş zamanlı veya inkübasyon sonrası birleştirme yöntemleriyle kullanılabilir.

Tetrazolyum Tuzu Yöntemleri

Tetrazolyum tuzları, formazanlar olarak bilinen oldukça renkli suda çözünmeyen mikro kristal birikintiler oluşturmak için alt tabakadan enzimatik olarak salınan hidrojeni kabul eden renksiz, suda çözünür tuzlardır.

Süksinik dehidrojenaz gibi birçok oksidatif enzim, metiliyazolildifenil tetrazolyum ve nitro mavi tetrazolyum (NBT) gibi tetrazolyum tuzları kullanılarak gösterilmiştir. Diazonyum tuzlarında olduğu gibi, çeşitli faktörler seçimlerini etkiler, ancak sentetik bir reçineye monte edilebildiği için NBT genellikle MTT’ye tercih edilir.

Indigogenic Yöntem

Çeşitli substratlar, bir PRP olarak salınan ve daha sonra turkuaz bir FRP oluşturmak için yakalama ajanı potasyum ferrisiyanür tarafından oksitlenen bir indoksil grubu içerir (Şekil 3.3). İnkübasyon solüsyonu ayrıca FRP’nin aşırı oksidasyonunu önleyen potasyum ferrosiyanür içerir.

Enzim histokimyasının tanısal uygulamaları

Enzim histokimyası, aşağıdakiler gibi çeşitli teşhis uygulamaları için kullanılabilir:

1. İskelet kası lifi tiplemesi.
2. Hirschsprung hastalığından şüphelenilen sinirler ve gangliyonlar.
3. Malabsorpsiyonu değerlendirmek için gastrointestinal doku.
4. Lenfoid ve miyeloid hücrelerin gösterilmesi.
5. Erken karaciğer dejenerasyonunun belirlenmesi.

İlk iki uygulama en yaygın olanıdır, ancak alışılmadık şekilde özel teşhis merkezleriyle sınırlıdır.

İskelet Kası

Nöromüsküler hastalıkların ve konjenital miyopatilerin teşhisinde enzim histokimyasının kullanımı, pek çok histopatolojik görünümün ancak enzim histokimyasının ortaya çıkmasından sonra tanınması ve tarif edilmesiyle sağlam bir şekilde yerleşmiştir.

Çizgili kasın geleneksel renklendirmeli boyaması, iltihaplı tepkileri ve lif boyutundaki değişiklikleri göstermek için yeterlidir, ancak çeşitli kas lifi türleri arasında ayrım yapamaz. Bu, birçok hastalık süreci belirli kas lifi türleriyle sınırlı olduğu veya bu türlerde değişiklik gösterdiği için önemlidir.

Bu, atrofi veya hipertrofi şeklinde ve bazı hastalıklarda iç hücresel yapının değişmesi şeklinde olabilir. Enine kesilmiş iskelet kasına enzim histokimyasal yöntemlerinin uygulanması, birkaç farklı lif tipinin ayırt edilmesini sağlar ve bu liflerin dağılımlarının ve boyutlarının incelenmesi tanıya yardımcı olabilir.

Çizgili kas lifleri, pH 9.4’te gösterilen ATPase aktivitesi düzeyine bağlı olarak, genel olarak Tip 1 ve Tip 2’ye bölünebilir. ATPase boyama, pH 4,2 veya 4,6’da bir tamponda ön inkübasyondan sonra uygulanırsa, Tip 2 fiberlerin 2A, 2B ve 2C alt tiplerine daha fazla farklılaşması sağlanabilir.

Gösterilmesi gereken bir diğer önemli enzim, McArdle hastalığında çizgili kas hücrelerinde eksik olan, ancak kan damarlarının düz kas hücrelerinde hala mevcut olan ve bu nedenle yararlı bir doğal kontrol görevi gören fosforilazdır.

NADH diyaforaz (indirgenmiş nikotinamid adenin dinükleotid) mitokondri ve sarkoplazmik retikulum ağını gösterdiği için kas hücrelerinin iç yapısını incelemek için kullanılır. Bu, ATPase tarafından gösterilen miyofibriler dağılımla karşılaştırıldığında, çeşitli patolojik durumlar ortaya çıkabilir.

Anormal enzim dağılım modelleri, genellikle, “hedef lifler”, “halka lifler” ve “merkezi çekirdekler” gibi belirli bir hastalık varlığına özgü görünümleri açısından tanımlanır.

Sitokrom oksidaz, süksinik dehidrojenaz ve laktat dehidrojenaz, mitokondri için daha spesifiktir ve mitokondriyal miyopatilerin belirlenmesinde yardımcı olabilir. İskelet kasının diferansiyel enzim boyamasının bir özeti gösterilmektedir.

Son zamanlarda, parafinle işlenmiş doku üzerinde güvenilir kas lifi tiplemesi için immünohistokimyasal yöntemler geliştirilmiştir. Bu, bu tür işlenmiş dokular için önemli tanısal potansiyele sahip olsa da, teşhis açısından önemli olan diğer enzimlerin veya bunların metabolik aktivitesini gösterme yeteneklerinin tanımlanmasına izin vermez.

Sinirler ve Gangliyonlar

Normal kolon ve rektumda, kolon hareketliliğinden sorumlu ganglion hücreleri ve ilişkili sinirler bulunur. Hirschsprung hastalığında çocuklarda, dairesel ve uzunlamasına düz kas bileşkesi (miyenterik pleksus) arasında ve submukozada gangliyon yokluğu vardır.

Ayrıca submukozada ve lamina propriada non-argyrofilik sinir liflerinin sayısında ve kalınlaşmasında belirgin bir artış vardır. Ganglion hücreleri bir H&E bölümünde kolaylıkla tanımlanabilir ancak sinir lifleri çok daha zordur.

The post Metal Çökeltme Yöntemleri – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).