Bununla birlikte, mikroişlemci kontrolünün tanıtılmasıyla birkaç dakika içinde hızlı bir geçiş sağlanabilir. FPLC sisteminin çok kullanışlı bir özelliği, hava girmeden kolon üzerine büyük örnek hacimlerinin (50 ml’ye kadar) yüklenmesine izin veren “süper döngü” olarak adlandırılır.

Konvansiyonel HPLC aparatı için benzer bir ekipman parçası en yararlı olacaktır, çünkü şu anda büyük bir hacmi yüklemenin tek yolu ya pompa kafalarından ya da çok büyük numune devrelerinden geçmektir.

Applied Biosystems Ltd., proteinlere ayrılmış HPLC ekipmanı listesine yakın zamanda bir ekleme yaptı. Aralık, bir protein sıralayıcı (470 A), bir protein saflaştırma sistemi (130 A), bir peptit sentezleyici (430 A) ve bir amino asit analiz sisteminden (120 A) oluşur.

Kromatografik modül, çok küçük miktarlarda malzeme ile kullanılmak üzere özel olarak tasarlanmış bir mikro delikli HPLC sistemidir. Sütunlar Brownlee kartuşlarından oluşur.

10 ila 100 pl / dak sırasındaki akış hızları, gelişmiş mikroişlemci kontrollü şırınga pompaları (ABI 130) tarafından üretilir. Bu ekipman pahalıdır ancak en yüksek kalitededir.

 Dedektörler

Bu bölüm, her bir dedektör kategorisinin ayrıntılı bir açıklaması olarak değil, okuyucunun belirli bir dedektörün potansiyel kullanımları hakkında temel bir anlayış kazanmasını sağlamak için bir genel bakış olarak yazılmıştır. Dedektörlerin kullanımı ve çalışmasının daha kapsamlı bir açıklaması için okuyucu başka bir yerde belirtilmiştir.

Algılama, aşağıdakilere bağlı olan modlara uygun şekilde kategorize edilebilir:

(1) İlgili çözünen maddenin bazı özellikleri.
(2) Bazı genel özelliklere göre çözünen madde ve çözücünün farklı davranışı.
(3) Çözünen maddeyi bağımsız olarak saptamak için çözücünün çıkarılması.

Borulu dedektör
Endüstriyel metal dedektör
Konveyörlü Metal Dedektör
Gıda Metal Dedektörü
Konveyör Metal Dedektörü
Satılık gıda Metal Dedektörü
Gıda paketleme Metal Dedektörü
Boru Tipi Metal Dedektörü

Ultraviyole (UV) Algılama

Şüphesiz UV dedektörleri, şu anda HPLC ile birlikte kullanılan en popüler dedektörlerdir ve çok yönlülükleri, güvenilirlikleri, duyarlılıkları ve nispeten düşük maliyetleri nedeniyle tercih edilmektedir. Tespit, uygun bir kromoforun varlığına bağlıdır ve tamamen tahribatsızdır. Numune konsantrasyonu ile absorbans arasındaki ilişki Beer-Lambert denklemi ile tanımlanabilir:

 (Zo / Z) = EX LX C

Z iletilen ışık, Zo gelen ışık, E molar sönme katsayısı (o belirli dalga boyunda), L optik yol uzunluğu ve C molar konsantrasyondur.

En basit ve en ucuz dedektör türü, sabit dalga boyu dedektörü (FWD) olarak bilinir. Bu dedektörler genellikle bir W kaynağı olarak bir cıva lambası kullanır ve ilgili dalga boyunun seçimini mümkün kılmak için farklı girişim filtreleri kullanır.

Örneğin, popüler filtrelerden bazıları 214, 220, 254 ve 280 nm’dir. Düşük dalga boyunda izleme için alternatif ışık kaynakları mevcuttur: 214 nm’de çinko ve 229 nm’de kadmiyum vardır.

Kalite kontrol izleme gibi rutin işlemler için, basit bir UV fotometre genellikle yeterlidir; bununla birlikte, bileşiklerin çeşitli dalga boylarında izlenmesinin gerekebileceği araştırma çalışmaları için bir alternatif, değişken bir dalga boylu UV detektörü (VWD) kullanmaktır.

Bu dedektörler iki türdendir; ilk olarak, istenen dalga boyunu seçmek için bir monokromatör ile kombinasyon halinde bir görünür veya UV kaynağı (sırasıyla tungsten lambası ve döteryum lambası) kullananlar ve ikinci olarak, sabit bir dalga boyunda izlemeye izin vermek için bir fotodiyot dizisi kullananlar veya tüm dalga boyları spektrumunda yer alır.

Fotodiyot dizisi dedektörleri, bir elüsyon zirvesinin tüm absorbans spektrumunu izleme kabiliyetleri ve dolayısıyla pik tanımlamaya yardımcı olarak bu zirveyi “parmak izi” göstermeleri nedeniyle son beş yılda giderek daha popüler hale geldi. Sofistike bilgisayar grafikleri ile birlikte ayrıntılı bir elüsyon zirveleri spektrumu elde edilebilir.

Fotodiyot dizisi dedektörleri, elüsyon zirvelerini hızla tarayan alternatif motorlu monokromatör UV dedektörlerine göre bir dizi avantaja sahiptir.

Fotodiyot dizisi dedektörlerinin iki önemli avantajı, daha az hareketli parçaya sahip olmaları (dolayısıyla mekanik arıza riskini azaltmaları) ve ayrıca yüksek akış hızlarında en yüksek çarpıklığa daha az eğilimli olmalarıdır.

Düşük dalga boylarında izleme yapılırken, mobil fazda kullanılan çözücülerin seçiminde dikkatli olunmalıdır çünkü birkaç popüler çözücü, nispeten yüksek dalga boylarında UV kesmelerine sahiptir.

Özellikle dedektörlerin yüksek hassasiyette kullanıldığı yerlerde genel olarak HPLC sınıfı çözücülerin kullanılması gerektiği vurgulanmalıdır. Dahası, saflaştırılmış çözücülerin kullanılması kullanım ömrünü uzatmaya yardımcı olabilir.

UV dedektörlerinin hassasiyeti genellikle düşük nanogramdadır. Bu, numune türevlendirmesi ile arttırılabilse de, detektör akış hücresinin tasarımındaki değişikliklerle tespit hassasiyeti de artırılabilir ve akış hücresinin hacminin HPLC sistemine uyacak şekilde seçilmesi gerektiğini vurgulamak önemlidir; bu nedenle çok düşük hacimli bir akış hücresi (örneğin 1-2 ul), mikro delik veya çok yüksek sütun verimliliklerinin beklendiği çok küçük partikül kolonları ile kullanılmalıdır, oysa daha büyük akış hücreleri (örneğin 5 ul) daha geleneksel sistemlerle kullanılmalıdır.

Floresan Algılama

Flüoresan saptama genellikle, çözünen maddenin başka hiçbir özelliğinin (örn., RI saptamasının UV’si) uygun olmadığı ve çözünen maddenin kendisinin kendine özgü bir özelliği veya çözünen maddenin türetilmiş bir formu olabileceği durumlarda kullanılır. Çözüm çalışmaları, saptama hassasiyetinin UV’ye göre üç kademe kademe artırılabileceğini göstermiştir.

Bu, fizyolojik sıvılar, katekolaminler ve diğer poliaminler dahil olmak üzere çeşitli bileşikler için kolon sonrası floresan saptama yöntemlerinin popülaritesini artırmıştır. Floresan saptamanın popüler bir kullanımı, hiçbir uygun intrinsik kromoforun bulunmadığı peptit kimyasındadır.

Ortoftalaldehit ve flöreskamin gibi türevlendirme ajanları, düşük pikomol miktarlarının saptanmasına olanak tanıyan hem kolon öncesi hem de sonrası sistemlerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ek olarak, saptama, steroidler, vitaminler ve nükleotidler gibi birçok bileşiğin içsel floresansı kullanılarak gerçekleştirilebilir.

The post Lab Dedektörleri – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).