DU testinin yarı otomatik teknolojisi, daha yüksek verime sahip laboratuvarlara uygundur. Benzer ilkeler, sabit virüs konsantrasyonlarını antiviralin seri dilüsyonlarına karşı test etmek için geçerlidir, ancak 2-3 günlük inkübasyondan sonra CPE spektrofotometrik olarak ölçülür.

1 saat içinde hayatta kalan canlı hücreler tarafından absorbe edilen nötr kırmızı boya miktarları, daha sonra tamponlu alkole ayrıştırılarak, CPE ve virüs titreleri ile ters orantılı olan optik yoğunluk okumaları üretir. Objektif olarak okunabilir ve otomatik olarak ID50 değerlerine göre hesaplanabilirler.

Sıvı kaplamalar kullanıldığından, ID50 tahminleri PR testlerinden daha yüksektir ve bu nedenle direnç eşikleri yükseltilir, örn. asiklovir için 2 ila 3 mg/ml. Mikrotitre plakalardaki teknik, daha az reaktif gerektirir ve toplam izolatın yalnızca% 3-9’unu oluşturan dirençli suşları tespit eder. Ancak, PR testleri dirence bağlı klinik başarısızlığı daha doğru bir şekilde tahmin eder.

DNA Sentezi Deneyleri

Kültür hücrelerinde viral DNA sentezi, spesifik radyo-etiketli DNA probları ile hibridizasyon yoluyla ölçülebilir. Antiviral ID50, bağlı probdan gelen sinyalde %50 azalmaya neden olan konsantrasyon olarak ölçülür.

Tanımlanmış bir virüs büyümesi periyodunun sonunda parçalanan hücrelerden alınan DNA, ya naylon “fitillere” aktarılır ve 125I etiketli problar (ticari Hybriwix testi) kullanılarak nicelendirilir, ya da nitroselüloz filtrelere, ardından 32P etiketli problarla hibridize edilir. Bu testler PR testlerinden daha hızlıdır, 4-6 günde sonuç verir ve HSV, CMV ve VZV suşlarında direnci saptamak için kullanılmıştır. Dezavantajları maliyetleri ve probların kısa raf ömürleridir.

HSV veya VZV suşlarında asiklovir direnci, direnç mekanizması gösterilerek doğrulanabilir. Dirençli suşların çoğu, tiyidin kinaz (TK) geninde mutasyon gösterir, bu da onları asikloviri fosforile edemez ve aktive edemez hale getirir.

TK eksikliği, 125I-iyododeoksisitidin veya 14C-timidin kullanılarak plak otoradyografisinde azaltılmış bir sinyal olarak uygun hücre hatlarındaki radyoetiket birleştirme deneylerinde ölçülebilir. Bu, asiklovirin fosforile edilememesiyle iyi ilişkilidir.

Genetik test
Genetik test çeşitleri
Devlet hastanesinde genetik test ücretleri
Genetik test nasıl yapılır
Genetik tarama testi fiyatları 2020
Genetik test yaptıranlar
Bebeklerde genetik testi nasıl yapılır
Genetik test sonucu yorumlama

Protein Sentezi Deneyleri

Bazı virüsler için büyüme, kültür hücrelerinde kolaylıkla tanımlanabilen virüs proteinlerinin ortaya çıkmasıyla izlenebilir. En iyi örnek, enfeksiyondan 18 saat sonra köpek böbreği tek tabakalarında enzim bağlantılı immünosorbent testinde (ELISA) monoklonal antikor kullanılarak saptanabilen influenza A hemaglutinindir.

Amantadin veya rimantadine direnç, yüksek antiviral konsantrasyonlar dışında, ELISA optik yoğunluk okumalarını, yani hemagglutinin sentezini azaltmada başarısızlık olarak gösterilir. Bu test, dirençli suşları PR testlerinden daha başarılı bir şekilde açıkça ayırt eder ve influenza A için tercih edilen yöntemdir.

Lisanslı anti-nöraminidaz ajanları oseltamivir ve zanamivir’in ortaya çıkmasıyla birlikte, antiviral direnç, bir florojenik substrat kullanılarak influenza doku kültürü süpernatlarında viral enzim aktivitesinin azaltılmış inhibisyonu olarak ölçülebilir.

HSV, VZV ve CMV için erken veya geç proteinleri tespit eden viral antijen ekspresyon testleri de mevcuttur. Antiviraller tarafından antijen ekspresyonunun inhibisyon derecesi, PR testlerinden daha hızlı ve daha otomatik olan akış sitometrisi ile ölçülebilir.

Genotipik Testler

Spesifik virüs genleri içindeki nokta mutasyonlarının antiviral direnç sağladığı bilindiğinde, bunlar ya virüs izolatlarında ya da klinik numunelerde, genellikle kanda doğrudan test edilebilir. Mutasyonlar genellikle klinik örneklerde ilgili DNA sekanslarının polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) amplifikasyonu ve ardından mutasyona özel problarla sekans analizi veya hibridizasyon ile tanımlanır.

Muhtemelen en hassas saptama yöntemi olan dizi analiziyle birlikte, önemli bir dizi şirket içi veya ticari tahliller artık mevcuttur. Metodolojinin karmaşıklığı ve yorumlanması, artık HIV direnci için rutin olarak yapıldığı uzman laboratuvarlarda test yapılmasını gerektirir.

Duyarlılık sonuçları, üç ana anti-HIV grubunun her biri içindeki ayrı antiviraller üzerinde rapor edilir: nükleozid ters transkriptaz inhibitörleri, nükleozid olmayan ters transkriptaz inhibitörleri ve proteaz inhibitörleri.

CMV fosfotransferaz veya DNA polimeraz genlerindeki ve influenza A transmembran protein genindeki mutasyonlar da antiviral dirençle bağlantılıdır, böylece genotipik testler için hedefler sağlar.

Bu yaklaşımın avantajı, virüsün izole edilmesi, büyütülmesi ve miktarının belirlenmesi ihtiyacını ortadan kaldıran doğrudan olmasıdır. Sadece teknik olarak daha hızlı değil; Direnç mutantları, dirençli virüs izole edilmeden önce kanda tanımlanabilir.

Dezavantajları, spesifik mutasyon(lar) bilinmediğinde direncin saptanamaması veya bir numunedeki toplam viral popülasyonun düşük bir oranı (örneğin < %10-25) olarak mevcut mutasyonların saptanamamasıdır.

Sonuç

Klinik uygulamada, antiviral tedaviyi ampirik veya vekil belirteç kanıtlarına göre değiştirme kararları muhtemelen devam edecektir. Bununla birlikte, direnci doğrulamak için in vitro duyarlılık testi için hala bir yer vardır. CMV veya HIV direnci, fokal heterojenlik gösterebilir, örn. dirençli CMV retinal izolatları, tedavi stratejisini etkileyecek hassas sistemik izolatlarla eş zamanlı olarak vb.

Son yıllarda antiviral terapide hızlı yenilik görüldü ve potansiyel olarak faydalı bileşiklerin taranması açıkça iyi duyarlılık tahlillerine dayandı. Daha yeni antivirallerin tanıtılması, kombine tedavinin değerlendirilmesi ve in vitro ve in vivo dirence ilişkin çelişkili verilerin araştırılması, tümü bu metodolojiye olan talebi artırmalıdır.

Çoklu ilaç tedavisi kullanılarak HIV enfeksiyonunun mevcut geliştirilmiş yönetimi ile, genotipik HIV antiviral direnç testi, tedavi başarısız olduğunda yönetim repertuarının bir parçası haline gelmiştir.

Hücreye bağımlı bağışıklık

Viral enfeksiyonun üstesinden gelmede etkili bir hücresel bağışıklık tepkisi önemlidir, ancak rutin laboratuvar araştırmaları neredeyse tamamen hümoral tepkiye odaklanır. Hücresel bağışıklık testleri, serolojik testlere kıyasla büyük verime çok daha az uygundur.

Araştırma çalışmaları dışında, bu testler, herpes grubu enfeksiyonlarının üstesinden gelememe gibi eksiklik araştırmaları için ayrılmıştır. Tipik in vitro tahliller, lenfosit fonksiyonunun iki yönünü değerlendirir: virüsü tanıma yeteneği (proliferasyon tahlillerini kullanarak) ve enfekte olmuş hücreleri yok etme yeteneğidir (sitotoksisite tahlillerini kullanarak).

The post Genotipik Testler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).