Çeşitli üreticilerin çeşitli fraksiyon toplayıcıları mevcuttur ve çok daha büyük hacimleri toplayabilen preparatif HPLC’de kullanılanlara ek olarak düşük mikro litre hacimleri toplayabilenleri içerir.

HPLC sistemleri ile kullanılacak fraksiyon toplayıcılar çok hızlı tüp değiştirme tesisleri gerektirir ve ayrıca HPLC sistemleri ile kullanılan solventlere karşı dayanıklı olmalıdır; bu nedenle, düşük basınçlı kromatografi ile kullanılmak üzere tasarlanmış fraksiyon toplayıcılar genellikle yetersizdir.

Daha yakın zamanda pazarlanan fraksiyon toplayıcılardaki önemli bir özellik, basit zamanlı toplamadan tüm HPLC sisteminin tam entegre kontrolüne kadar bir dizi özellik sağlayan gelişmiş mikroişlemci kontrolünün piyasaya sürülmesidir.

Hem LKB hem de Pharmacia, HPLC sistemlerinde genel amaçlı kullanım için ideal olan ve aynı zamanda nispeten kompakt olan döner fraksiyon toplayıcıları tedarik etmektedir.

Pharmacia fraksiyon toplayıcı, toplama tüplerini değiştirmek için bir temas kolu üzerinde basınçlı bir ped kullanırken, LKB toplayıcının tüp değiştirmeyi etkileyen hareketli bir karusele sahip sabit bir kolu vardır. Hem LKB hem de Pharmacia makineleri nispeten ucuzdur.

Gilson, mikroişlemci kontrolü ile çeşitli görevlerin gerçekleştirilmesine izin veren daha karmaşık (ve dolayısıyla daha pahalı) bir makine yelpazesi üretmektedir.

Bu makine, seçilen piklerin veya zaman pencerelerinin toplanmasına izin verir ve toplanabilecek numune hacmi neredeyse sınırsızdır. Dahası, bu makinenin akıllı programlama ve hafif mekanik modifikasyonu, numuneleri bir sütun öncesi modunda (örneğin OPA ile) türetmesine ve ardından türetilmiş numuneleri otomatik olarak enjekte etmesine olanak tanır.

Fraksiyon Toplayıcı nedir
Fraksiyon toplayıcı ne işe yarar
Flotasyon Reaktifleri

Otomasyon

Otomatik örnekleyici

Bir kromatografik sistemin otomasyonundaki en belirgin adım, numune enjeksiyonunun otomatikleştirilmesidir. Operatör katılımı olmadan tekrarlanan işlevleri gerçekleştirme yeteneği, tüm kromatograflar için mevcut olan emek tasarrufu sağlayan bir yöntemdir.

Waters Intelligent Sample Processor (WISP) ve Kontron MS1 ​​gibi ihmal edilebilir çapraz kontaminasyonla 10 pl’den daha düşük hassasiyete sahip makineler çoğu uygulama için uygundur. Alternatif olarak, daha önce açıklanan Gilson makinesi de dikkate alınmaya değer.

Mikroişlemci Kontrolü

gösterilen kromatografik işlemin her aşamasında, Gösterildiği gibi bir tür entegre işlem kontrolü eklenebilir. Bu, mevcut HPLC makinelerinde iki biçimde olabilir.

İlk olarak, daha popüler makinelerde, genellikle disket veya teyp sürücüsünde (örneğin, Waters, Varian, Hewlett Packard, Altex, Pye Unicam, Micrometrics) özel olarak yazılmış yazılıma sahip yerleşik mikroişlemci kontrol modülleri bulunur.

Bu kontrol sistemi, enstrümanı özellikle göreve ayrılmış bir cihaz olarak tutar. Alternatif bir form, özel olarak yazılmış bir yazılıma sahip (örneğin Gilson, ACS, LKB) bir mikro bilgisayar (ör.Apple 11) kullanır.

Bu son sistem, mikro bilgisayarın HPLC makinesini kontrol etmek için kullanılmadığında başka amaçlar için kullanılabilmesi gibi ek bir avantaja sahiptir. Bu sistemler ayrıca genel sistem kontrolüne ek olarak bir tepe entegrasyon paketi sunar.

Üreticilerin kapsamlı bir listesi ve şu anda HPLC’de kullanılmakta olan bileşenlerin türü McNair (1984) ‘te bulunabilir.

Yüksek performanslı iyon değişim kromatografisi

İyon değişim kromatografisi, şimdi yüksek performanslı sıvı kromatografisi olarak adlandırdığımız noktaya kadar geliştirilen ilk kromatografi moduydu. İlerlemeler, 1950’lerin başında, amino asit analiz tekniklerini geliştirme gereksinimi ile başladı.

Kullanılan basınçlar başlangıçta oldukça düşüktü (yaklaşık 100 psi, cam sütunların çalışma sınırı). Aynı gereklilik daha sonra idrardaki ve kandaki nükleotidler gibi diğer birçok biyokimyasal bileşiğin analizi için talep edildi.

Kromatografik destekler, performansı iyileştirmek amacıyla giderek daha küçük çaplarda yapılan polistiren-divinilbenzen kopolimer reçinelerinin küresel boncuklarına dayanıyordu. Hassas delikli paslanmaz çelik kolonların ortaya çıkışı, reçinelere daha fazla talep gelmesi anlamına geliyordu ve çapraz bağlı polistirenin daha yüksek basınçlara dayanamayacak kadar yumuşak olduğu görüldü.

Bu, yalnızca yüksek basınçlara dayanabilen değil, aynı zamanda mikro partikül paketleme teknolojisine uygun olan iyon değişimli kolon paketleri için bir araştırmaya yol açtı. Yüzeyde bir tabaka halinde tutturulmuş iyonik moleküllere sahip cam boncuklardan oluşan pellicular ambalajlar geliştirildi.

Pelliküler paketler, yüksek basınçlara çok uygundur, ancak boncuklar nispeten büyüktü ve düşük bir kromatografik verimlilik sağladı. Ayrıca, orijinal polistiren-divinilbenzen reçine destekleriyle karşılaştırıldığında nispeten düşük bir kapasiteye de sahiptiler.

Bununla birlikte, 1970’ler boyunca, silika bazlı iyon değişim reçineleri geliştirildi ve örnek kapasiteleri artık kabul edilebilir kromatografi sağlayan seviyelere yükseldi, ancak modern amino asit otoanalizörleri hala çapraz bağlı polistiren sabit fazlar da kullanıyor.

Mekanizma

İyon değişim kromatografisi, sabit fazdaki yüklü moleküller ile mobil fazdaki yüklü çözünen maddeler ve iyonlar arasındaki etkileşime bağlıdır. Basit anyon değişimli kromatografide, çözünen iyonlar Y(-) sabit fazdaki pozitif bölgeler (+) için mobil faz iyonları X- ile rekabet ederler (bunlar genellikle DEAE gibi üçüncül amonyum kısımlarıdır).

Alternatif olarak, katyon-değişim kromatografisinde, çözünen iyonlar Yf mobil faz iyonları X + fornegatifitler (-) onthestationaryphase (sülfo-propil veya karboksimetil gibi bu yumuşakensülfonik asit kısımları) ile de rekabet eder.

Ayrılma, iyon değişim durağan fazı ile zayıf bir şekilde etkileşime giren numune iyonları kolon üzerinde zayıf bir şekilde tutulacağı ve erken ayrıştırılacağı için, iyon değişim durağan fazı ile güçlü bir şekilde etkileşime giren çözünenler kuvvetli bir şekilde tutulacağı ve daha sonra ayrışacağı için de elde edilir. 

Bu etkiler, zayıf yüklü nükleotit monofosfatlardan daha yüksek yüklü nükleotit trifosfatlara kadar tutulmada bir artış olduğu da gösterilmektedir.

Çözünen moleküllerin iyon değişimi durağan fazı ile etkileşimi, ardışık iki aşamalı bir süreç olarak kabul edilebilir. Başlangıçta çözünen madde mobil fazdan (genellikle sulu) sabit faza (genellikle organik) da yayılmalıdır.

İki aşama arasındaki dağılım, belirli bir çözünen maddenin tutulmasından büyük ölçüde sorumludur. İkinci olarak, çözünen madde, durağan faz ile etkileşime girmeli ve içinden  de yayılmalıdır.

The post Reaksiyon Toplayıcılar – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).