Hücre tabakasında kalan hücreler kültür süpernatantına kazınır ve elde edilen materyalden birkaç damla taze bir hücre kültürü tüpüne aşılanır. Orijinal kültürde gerçekten bir virüs varsa, o zaman sadece CPE yeni tüpte yeniden görünmekle kalmaz, aynı zamanda virüsün miktarı veya titresi, virüsü takiben önemli ölçüde artacağından, geliştirme hızı da çok artırılmalıdır. 

Bununla birlikte, orijinal CPE numunenin bazı toksik bileşenlerinden kaynaklanmışsa, bu ikinci tüpte seyreltilmiş olacaktır ve sonraki CPE, hiç değilse daha yavaş ve daha az kapsamlı bir şekilde gelişmelidir.

Virüslerin geçişi diğer iki nedenden dolayı yararlıdır. İlk olarak, replikasyon gerçekten gerçekleşiyor olsa bile, bazı virüsler kültürde ilk büyüdüklerinde görünür bir CPE üretmeyebilir. Bununla birlikte, aynı hücre substratında tekrarlanan geçişlerde, bir CPE, virüsün bu belirli hücre tipindeki büyümeye adaptasyonunu takiben belirgin hale gelebilir.

Görünüşe göre normal görünen hücrelerden virüsleri geçirme süreci kör geçiş olarak bilinir, çünkü muhtemelen bu aşamada virolog virüsün varlığına dair kanıt göremez. Tavşan böbreği (RK13) hücrelerinde büyüyen kızamıkçık virüsünün tanımlanması, bu tür birkaç kör geçiş gerektirebilir. İkincisi, virüslerin geçişi, nötrleştirme deneyleri gibi daha ileri çalışmalar için mevcut virüs miktarını artırmak için iyi bir yöntemdir (aşağıya bakınız).

Virüs İzolasyonunun Doğrulanması

Çoğu durumda, bir hücre kültüründeki virüs tipi, yukarıda belirtildiği gibi hücre yaprağında bulunan CPE’nin özelliklerinin gözlemlenmesiyle makul bir kesinlikle belirlenebilir.

Ancak, virüs kimliğinin doğrulanmasının gerekli olabileceği durumlar vardır, örn. CPE atipik ise, iyi geçmiyorsa veya yoksa veya alternatif olarak belirli virüs suşu hakkında daha fazla bilgi gerektiğinde. Bu, elektron mikroskobu, antijen saptama veya nötralizasyon deneyleri kullanılarak sağlanabilir.

Hücre kültürü süreci, elektron mikroskobu (EM) ile görselleştirmeye izin vermek için viral titrenin yeterli bir seviyeye yükseltilmesi için bir araç olarak işlev görür. Bu nedenle, bir EM’ye erişim sağlandığında, atipik veya olağandışı CPE’lerle ilişkili çoğu sorun, hücrelerin veya kültür süpernatantının uygun EM incelemesi ile hızla çözülebilir. Virüslerin bir konsantrasyonda olması gerekir! Bu tekniği başarıyla kullanmak için 106 partikül / ml.

Belirli bir virüsle enfekte olan hücreler, bu virüsten türetilen antijenleri ifade edecektir. Bu antijenler, antikorlarla boyanarak tespit edilebilir. Bu nedenle, hücre kültüründe büyüyen bir virüsün spesifik kimliği, hücrelerin bir immünofloresan etiket ile uygun şekilde etiketlenmiş uygun monoklonal antikorlardan oluşan bir panel ile boyanmasıyla belirlenebilir.

Hücreler ya kazınabilir ve hücre kültürü tüplerinden emilebilir ve daha sonra çok noktalı Teflon kaplı bir cam slayt üzerinde kurutulabilir veya önceden antijen tespitinin gerekli olacağı biliniyorsa, hücreler üzerinde büyütülebilir. hücre kültürü tüpü içinde daha sonra geri alınabilen, sabitlenebilen ve boyanabilen lamel gibi düz bir yüzeydir.

Antijen tespiti, tümü benzer bir pozitif hemadsorpsiyon testi üreten influenza A ve B virüsleri veya parainfluenza 1, 2, 3 veya 4 virüsleri arasında ayrım yapılmasına izin verecektir (aşağıya bakınız).

Nötralizasyon tahlilleri, en yaygın olarak, kültürde çoğalan çeşitli enterovirüsleri ayırt etmek veya adenovirüsleri serotiplemek için kullanılır. Prensip olarak, kültürde izole edilen virüs bir dizi tüpe dağıtılır ve her tüpe farklı bir antiserum eklenir (örn., 1., 2. ve 3. tüplere anti-polio-1, anti-polio-2, anti-polio-3).

Virüs artı antiserumun 1 saat inkübasyonunun ardından, karışımlar ayrı hücre kültürü tüplerine eklenir ve sonraki birkaç gün boyunca CPE’nin görünümü izlenir. 1 ve 3 numaralı tüplerde tipik bir CPE’nin yokluğu ile birlikte oluşumu Tüp 2’deki bir CPE, orijinal virüsün poliovirüs tip 2 olduğunu gösterir.

Adaptasyonda gen yapısı değişir mi
Hücresel adaptasyon
Adaptasyon örnekleri
Hücre Adaptasyonu nedir
Patolojik adaptasyon nedir
Fizyolojik adaptasyon Nedir
Hücresel adaptasyon tanımı
adaptasyon nedir 8. sınıf

Hücre Kültürünün Adaptasyonları

Hücre kültürü ile virüs izolasyonu, cansız ortamda bakteriyel izolasyondan genellikle çok daha yavaştır. En hızlı büyüyen virüs, herpes simpleks virüsü, 18 saat sonra bir CPE üretebilir, ancak çoğu virüs bunu yapmak için birkaç gün (hatta haftalar) gerektirir.

Bu önemli bir dezavantajdır! Bu nedenle, süreci hızlandırmak amacıyla hücre kültürünün çeşitli modifikasyonları tanıtıldı. Teşhis laboratuarları tarafından yaygın olarak benimsenen bu tür iki modifikasyon, hemadsorpsiyona ait olanlar ve erken antijen floresan odaklarının saptanmasıdır.

Bazı virüsler (ör. Grip ve parainfluenza virüsleri, kabakulak virüsü) bir hemaglutinine (yani kırmızı kan hücrelerini bağlayan bir protein) sahiptir. Enfekte hücreler bu molekülü yüzeylerinde ifade edeceklerdir. Bu nedenle, kırmızı kan hücreleri, böyle bir virüsün çoğaldığı bir hücre kültürü tüpüne eklenirse, bunlar, hemadsorpsiyon olarak bilinen bir fenomen olan hücre yaprağına yapışık hale gelecektir.

CPE belirgin hale gelmeden önce birkaç gün boyunca hemadsorpsiyon gösterilebilir (kültür tüpünü nazikçe döndürerek). Hem adsorbe edici virüsün tam doğası, yukarıda tarif edildiği gibi (antijen tespiti) monoklonal antikorlar ile boyanarak belirlenebilir.

Erken antijen floresan odaklarının tespiti (DEAFF testi), hücre kültüründe sitomegalovirüsün (CMV) tespitini hızlandırmak için özel olarak geliştirilmiştir. Özünde, DEAFF, tespit edilecek antijenlerin, virüsün replikasyon döngüsünde (dolayısıyla ‘erken antijenler’) erken (24-48 saat içinde) ortaya çıkanlar olarak seçildiği bir antijen tespit uyarlamasıdır.

Bu nedenle klinik materyal, bir lamel veya başka bir düz yüzeyde (“kabuk flakon” olarak bilinen bir kültür türü) büyütülen bir hücre tabakasına aşılanır. Hücre tabakasının virüs tarafından enfektivitesini büyük ölçüde artıran bir santrifüjleme aşaması (1 saat süreyle 2500 g) vardır. 24 saat sonra, tabaka yıkanır ve daha sonra bir CMV erken antijenine yönelik bir floresan etiketli monoklonal antikor ile boyanır. Lamel daha sonra UV ışığı altında incelenir.

Pozitif bir sonuç, morfolojik olarak normal görünen izole edilmiş hücrelerde (yani odaklar) floresan çekirdeklerin varlığı ile gösterilir. Bu teknik, diğer yavaş büyüyen virüsleri de kapsayacak şekilde genişletilmiştir, örn. adenovirüsler, erken adenovirüs antijenlerine karşı antikorlarla boyanarak herhangi bir CPE ortaya çıkmadan çok önce tespit edilebilir.

The post Adaptasyonlar – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).