Testosteronun başlıca hidroksile metabolitlerini ayırmak için bir ODS durağan fazı kullanarak, 2p-, 6p-, 7a-ve 16a-hidroksitestosteronu çözmek için metanol-su başlangıç mobil fazı, ancak metanol-su-‘nun ikinci bir mobil fazı kullanıldı. testosteron ve androstenedionun ayrıştırılması için asetonitril gerekmiştir.

Bununla birlikte, 7- ve 6p-hidroksitestosteronun temel ayrımına ulaşılamamasına rağmen, farklı seçicilik özelliklerine sahip bir ODS durağan fazının kullanımının daha iyi çözünürlük sağlayabileceği kaydedildi.

Testosteron, androstenedion, 17a-hidroksiprogesteron ve progesteron dahil olmak üzere dört farklı testiküler A4-3-ketosteroidin aynı anda ayrılması, tetrahidrofuran-metanol-su veya metanol-asetonitril-su mobil fazı ile bir ODS sabit faz kullanılarak rapor edilmiştir.

Androstanların saptanması için en uygun yöntem, karakteristik UV emilimlerini kullanmaktır. A4-3-ketonlar (androstenedion ve testosteron dahil) 254 nm’de güçlü bir absorpsiyona sahiptir, öyle ki 30 ng kadar az testosteron tespit edilebilir.

17-ketosteroidler (androsteron ve etiyokolanolon dahil) 280 nm’de izlenebilir, ancak tespit hassasiyeti A4-3-ketonlarınkinden beş kat daha azdır.

Androstanların UV emilimini artırma yöntemleri tarif edilmiştir ve 2,4-dinitrofenilhidrazinin steroid hidrazonlar oluşturmak için kullanımını ve karşılık gelen steroid esterleri oluşturmak için benzoil veya p-nitrobenzoil klorür kullanımını içerir.

Steroidlerin tespitinin hassasiyeti bu sistemler kullanılarak artırılırken, reaktiflerin özgünlüğünün olmaması birden fazla ürünün oluşmasına neden olabilir. Daha yakın zamanlarda, bir floresan etiketleme ajanı olarak dansilhidrazin kullanılarak biyolojik sıvılarda konjuge 17-ketosteroidler belirlenmiştir.

Türevlendirme, elektrokimyasal saptama ile steroidlerin miktarının belirlenmesine izin veren bir yöntem olarak da kullanılmıştır. Bu nedenle, p-nitrofenilhidrazin, başlangıçta dekonjüge edildikten sonra insan serumundaki 17-ketosteroidlerin türetilmesi ve miktarının belirlenmesi için kullanılmıştır.

Bu yöntem, ters fazlı HPLC’den önce dekonjugasyona gerek kalmadan 17-ketosteroid sülfatların ön kolon dezinasyonuna izin verecek şekilde adapte edilmiştir.

Questran
QUESTRAN 4g
Cholestyramine
Cholestyramine ilaç
Questran 4g nedir
Cholestyramine side effects
Cholestyramine medscape
Questran 4g price

Oestranlar

Estranların doğru miktar tayini, bir gebeliğin ilerleyişi hakkında bilgi sağlamak için klinik kimyada büyük önem taşımaktadır. Gebeliğin son aylarında üriner östriyol seviyeleri normal olarak yükselir ve seviyelerdeki düşüş bir arızanın göstergesidir.

Estranlar genellikle idrarda konjugatlar olarak atılır ve çoğu analizde bunlar HPLC analizinden önce hidrolize edilir. Hidroliz için halihazırda kullanılmakta olan iki yöntem vardır, bunlar asit hidrolizi ve enzimatik hidrolizdir.

Önceki teknikte, numune, ekstraksiyondan önce 30 dakika boyunca C’dir. Enzimatik hidrolizde, tamponlu bir enzim çözeltisi (genellikle E. coli P-glukuronidaz), 30 dakika boyunca 60 ° C’de numune ile inkübe edilir.

Estranların ayrıştırılması için kullanılan en popüler HPLC teknikleri, ters fazlı ve ters fazlı iyon çifti HPLC ve daha az ölçüde normal faz kromatografisi ve anyon değiştirme kromatografisidir.

Ek olarak, ters fazlı çift bölme kromatografisi ve argentasyon kromatografisi kullanılmıştır. Bu tekniklerin her biri şimdi tartışılacak ve bunu, östraların tespitinde kullanılan yöntemlere ilişkin kısa bir not takip edecektir.

Ters fazlı veya ters fazlı iyon çifti tekniklerinin estranların ayrıştırılması için kullanıldığı durumlarda, kullanılan sabit faz genellikle sulu bir metanol veya asetonitril solüsyonundan oluşan bir mobil faz ile birlikte ODS olmuştur.

Örneğin, metanol -% 0.1 sulu amonyum karbonat, estriol ve östradiolün hareketli bir fazı ile bir ODS durağan fazı kullanılarak arka arkaya ayrıştırıldı.

Aynı yazarlar, bir silika sabit faz ve bir mobil etanol-n-heptan fazı kullanılarak normal bir faz ayrılması gerçekleştirildiğinde, elüsyon sırasının östron, östradiol ve östriole değiştirildiğini belirtmişlerdir.

Ters faz modunda, elüsyon sırasını belirlemede organik modifiye edicinin önemi, bir ODS sabit fazı ve asetonitril-% 0,5 sulu amonyum dihidrojen fosfat, pH 3.0’ın birkaç 17-keto ve 17 -‘yi çözmek için bir mobil fazı kullanılarak gösterilmiştir. hidroksil estranlar. Asetonitril yerine metanol ikame edildiğinde elüsyon sırasının tersine döndüğü kaydedildi.

25 konjuge ve konjüge olmayan oestranın çözünürlüğü için kapsamlı bir HPLC ayırma seti açıklanmıştır; bu, bir ODS durağan fazdan oluşan bir gradyan ters faz sistemi kullanılarak bir kompleks karışımın başlangıçta metanolün bir başlangıç ​​mobil fazı ile ilk ayrılmasını içerir. 

Ayrılan östranlar alıkonma sürelerine göre altı gruba ayrıldı ve ardından çözünürlüklerini artırmak için dört farklı kromatografik sistem kullanılarak ek HPLC analizine tabi tutuldu.

Bu sistemlerden ikisi, seri olarak bağlanmış bir çift ODS sütunu kullandı ve izokratikti:

(a) Metanol-0.01 M amonyum asetat, pH 3.97 (45: 55) mobil fazı kullanılarak, aşağıdaki gruplardan gelen östranlar daha da ayrıştırıldı: Grup I (östriol 3-glukuronid, östriol 3-sülfat, 17l3- p – glukuronid ), Grup 111 (östriol 16a-glukuronid, östriol 17p-glukuronid, östriol 17-sülfat) ve Grup IV (östran 3-glukuronid, östradiol 3-glukuronid, östradiol 17P-glukuronid).
(b) Grup 11 estranları (oestradiol 3,17-disülfat, estriol 3-sülfat) daha da ayrıştırmak için metanol-0.01 M amonyum asetat, pH 7.74 (35:65) mobil fazı kullanıldı.
(c) AC, kolon, Grup V estranların (östron 3-sülfat, östradiol 3-sülfat, 15a-hidroksi-oestriol) ayrılması için hareketli bir metanol 0.01 M amonyum asetat, pH 7.56 (25:75) fazı ile kullanılmıştır. 
(d) Bir Chromegabond Diol kolonu ve başlangıçta heksan ve son olarak heksan-2-propano1 (80:20) olan bir mobil faz kullanan normal bir faz gradyan sistemi, Grup VI estranlarını (östron, östradiol, estriol, 2) daha da çözmek için kullanıldı.

Estranların ayrılması için normal fazlı HPLC teknikleri kullanıldığında, sabit faz genellikle modifiye edilmemiş silikadır, ancak Diol kolonları da kullanılmıştır (daha önce tarif edildiği gibi).

Hareketli bir hekzan-etanol fazı ve bir silika sabit faz kullanılarak, östradiol, 6-ketoestradiol, 16-epioestriol, öestriol, 16,17-östriyol, 2-hidroksiyoestriol ve 6-hidroksiyoestriol dahil olmak üzere daha polar östrojenlerin iyi çözünürlüğü tanımlanmıştır. 

Benzer şekilde, bu yazarlar, daha az polar olan estranların ayrılması için bir mobil heksan-etanol fazının kullanılabileceğini belirtmişlerdir.

Genel olarak, epimerlerin normal faz kromatografisi kullanılarak daha iyi çözüldüğü önerilmektedir, ancak keton, hidroksi veya karbon-karbon çift bağ ilavesiyle farklılık gösteren bileşiklerin ayrılması gerektiğinde, ters fazlı kromatografi tercih edilen tekniktir.

The post Oestranlar – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).