Boncuklar ve antikor etiketli lenfositler daha sonra akış sitometresi ile eş zamanlı olarak analiz edilir ve mutlak lenfosit alt küme sayıları hesaplanabilir.

Analizörden geçen sabit bir kan hacmindeki lenfositleri sayarak alternatif bir yaklaşım sunulur, ancak bu, akış sitometresinin akışkanlarının güvenilirliğine bağlıdır. Kantitatif lenfosit analizleri için (ayrılmış lökositleri boyamak yerine) tam kan antikor boyama ve lizis yöntemleri kullanılmalıdır.

Lenfosit Alt Küme Analizinin Kullanımları

HIV enfeksiyonu/AIDS’in izlenmesi

Bu, lenfosit alt kümelerini istemek için en yaygın endikasyondur. Doğru kantitatif sonuçlar esastır. Tipik olarak, CD4+ T yardımcı hücre sayıları düşüktür ve CD4+’nin CD8+ T hücrelerine oranı terstir (sağlıklı erişkinlerde yaklaşık 1.5:1’dir).

Bununla birlikte, HIV enfeksiyonlu bir bireyde T hücre alt kümeleri tamamen normal olabileceğinden ve ayrıca lenfosit alt kümelerinin bozulmasının başka birçok nedeni olduğundan, HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için kullanılamaz, örn. stres, steroid tedavisi, araya giren enfeksiyon veya normal günlük varyasyon.

HIV enfeksiyonu serolojik veya moleküler biyoloji testleri ile teşhis edildiğinde, hastalığın izlenmesinde CD4 sayımları (PCR ile ölçülen viral yük ölçümleriyle bağlantılı olarak) esastır. İmmün baskılanma seviyesini ve antiretroviral ajanlar ve profilaktik antimikrobiyallerle tedaviye başlanması gerektiğinde kullanılırlar. Birleşik Krallık’ta HIV için CD4+ T hücre izleme performansı NEQAS tarafından harici kalite kontrolüne tabidir.

Lenfosit alt grupları testi nedir
Lenfosit alt grupları testi nasıl yapılır
T lenfosit alt grupları
Lenfosit alt grupları testi neden yapılır
Lenfosit subset analizi
Cd molekülleri Nedir
CD8+ T lenfosit
T lenfosit yüzey markerları

İmmün yetmezliğin araştırılması

Birçok primer immün yetmezlik hastalığı, lenfosit alt gruplarının anormallikleri ile ilişkilidir. Bazı örnekler Tablo 47.2’de verilmiştir.

Düşük bir toplam lenfosit sayısı genellikle ciddi immün yetmezlik teşhisi için ilk ipucu olsa da, eksiklik modelinin tespiti tanıya yardımcı olabilir, örn. korunmuş NK hücrelerine sahip T ve B hücrelerinin yokluğu, RAG-1 veya RAG-2 (T ve B hücre antijen reseptörlerinin oluşumunda rol oynayan genler) eksikliğini düşündürebilir. Şiddetli konjenital immün yetmezliklerin araştırılmasında genellikle lenfosit alt küme analizine ek olarak fonksiyonel çalışmalara ihtiyaç duyulur.

Bazı immün yetmezlik hastalıklarında, lenfosit popülasyonlarının mutlak sayıları normaldir, ancak daha ayrıntılı analizlerle ince anormallikler tespit edilebilir, örn. Primer antikor eksikliği (genel değişken immün yetmezlik) olan birçok hasta tamamen normal sayıda T, B ve NK hücresine sahiptir.

Bununla birlikte, B hücreleri anormal oranlarda naif ve bellek popülasyonları gösterir, bu da normal bir antikor repertuarı üretememelerinin nedeni olarak periferik B hücre olgunlaşmasında veya homeostazında bir kusur olduğunu gösterir.

Hiper-IgM sendromlu hastalardan alınan T hücreleri, CD154’ü (önceden CD40 ligandı olarak adlandırılır) ifade etmekte başarısız olur. CD154, normal olarak istirahat periferik kan T hücrelerinde eksprese edilmez ve önce T hücrelerinin in vitro olarak uyarılması ve ardından molekülün ekspresyonunun akış sitometrisi ile ölçülmesi gerekir.

Lökosit yapışma eksikliği (LAD), nötrofillerin (ve diğer beyaz hücrelerin) 2 integrini (CD11–CD18 heterodimerleri) ifade etmedeki başarısızlığından kaynaklanır. Sonuç olarak, hastanın nötrofilleri kan dolaşımından enfeksiyon bölgesine göç etmez ve tekrarlayan ciddi enfeksiyonlar (çok az irin oluşumu ile veya hiç oluşmadan) ortaya çıkar. Yara iyileşmesi de bozulur. Bu durum, akış sitometrisi ile CD18 ve CD11a, b ve c’nin nötrofil ekspresyonunu basitçe ölçerek teşhis edilebilir.

NOT: (a) Işık saçılımı ve CD45 ifadesi ile lökosit popülasyonlarının tanımlanması. Her nokta, tek bir hücreden toplanan verileri temsil eder. Lenfositler, orta ileri saçılıma (bir boyut indeksi), düşük yan saçılıma (SS, hücre karmaşıklığı veya granülerlik indeksi) ve yüksek CD45 ekspresyonuna sahiptir. (b) Lenfosit popülasyonunda CD3 ve CD4 ekspresyonu.

Hücreler, PMT1’de saptanan floresein-konjuge CD3 antikorları ve PMT2’de saptanan fikoeritrin-konjuge CD4 antikorları ile etiketlenmiştir. Lenfosit popülasyonu seçildikten sonra, CD3 ve CD4’ün ifadesi ya tek tek, histogramlar olarak ya da bir nokta-plot içinde birleştirilmiş olarak görüntülenebilir. Nokta grafiği, CD4+ hücrelerinin CD3+ hücrelerinin bir alt kümesi olduğunu gösteren ek bilgiler verir.

Lenfoid malignitelerin teşhisi

Periferik kan (veya kemik iliği) lenfositlerinin kantitasyon ve fenotip analizi, B ve T hücre lenfoproliferatif hastalıklarının tanısında esastır. Bu koşullarda B hücresi klonalitesi, genellikle B hücresi yüzeyinde immünoglobulin hafif zincirinin anormal ekspresyonu ile saptanır.

T hücreleri, hücre yüzeyinde herhangi bir klonal belirteç eksprese etmez, böylece maligniteler, diğer yüzey belirteçlerinin (örn. CD7, CD5, CD25) anormal ekspresyonu (kayıp veya anormal ekspresyon) ile tespit edilir.

Bu durumların çoğu, periferik kan lenfosit sayılarında belirgin artışlarla karakterize edilirken, bazıları (özellikle T hücreli neoplazmalar) klinik olarak belirsiz olabilir ve normal bir lenfosit sayısına sahip olabilir. Her durumda, lenfosit immünofenotipi, hastanın diğer klinik bulguları ve mikroskoptaki hücrelerin fenotipi bağlamında yorumlanmalıdır.

Diğer inflamatuar durumlar ve enfeksiyonlar

Periferik kan lenfosit alt kümelerinin ve fenotiplerinin anormallikleri, çok çeşitli enfeksiyöz ve enflamatuar hastalıklarda tanımlanmıştır. Ancak bu anormallikler nadiren tanısal olarak yardımcı olur ve asla spesifik değildir.

Kan ve kemik iliği dışındaki bölgelerden lenfositler

Beyin omurilik sıvısı ve bronkoalveolar lavaj sıvısı gibi diğer bölgelerden lenfositleri analiz etmek bazen yararlıdır. İkinci durumda, baskın lenfosit popülasyonları, farklı interstisyel akciğer hastalıklarını ayırt etmeye yardımcı olabilir. İlkinde, asıl amaç, merkezi sinir sistemini içeren lenfomayı dışlamak olacaktır.

NOT: Akış sitometresinin basitleştirilmiş düzeni. Hücreler bir lazer ışını içinden tek tek geçer. Her hücre için saçılan ışık, ileri ve yan ışık sensörleri tarafından ölçülür. Hücre üzerindeki floresan antikorlar, lazer ışığı tarafından uyarılır ve fotoçoğaltıcılar (PMT) tarafından ölçülen farklı dalga boylarında ışık yayar.

Daha büyük akış sitometrelerinde, her biri farklı bir dalga boyunda yayılan ışığı ölçen iki lazer ve birçok foto-çoğaltıcı, birçok farklı hücre molekülünün veya diğer özelliklerin aynı anda incelenmesini sağlar.

The post Lenfosit Alt Küme Analizi – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).