İyon değişim kromatografisi, estranların ayrıştırılması için kullanılmıştır ve genel olarak bu teknik, ters faz veya normal faz kromatografisinden çok daha az popüler olmakla birlikte, yine de iyi ayırmalar sağlayabilir.

Kullanılan sabit fazlar, silika bazlı veya selüloz bazlı anyon değişim kolonları olmuştur ve mobil fazlar, 0.01 M potasyum dihidrojen fosfat, pH 4.2 veya 0.1 M sodyum klorür, pH 5.0 veya perklorat (değişken konsantrasyonlar) plus olmuştur. 0.01 M fosfat tamponu, pH 6.8 olur.

Son yazarlar, genel olarak elüsyon sırasının estrioller, estranlar, ekilin, östradiol, 17a-dihidroekilin, equilenin ve dihidroequilenin olduğunu belirtmişlerdir. Ayrıca A halkası konjugatları D halkasından önce ve glukuronid konjugatları fosfatlardan ve sülfatlardan önce ayrıştırıldı.

Oestranların ayrıştırılması için iki ayrı ayırma tekniği daha açıklanmıştır: ters fazlı iyon çifti bölünmesi ve argentasyon ters fazlı HPLC.

Önceki teknik C veya C’de, kolonlar 1-pentanol ile kaplandı ve bir iyon eşleştirme reaktifi olarak tetrapropilamonyum hidroksit ile kullanıldı. İkinci teknikte, östriyol, ekilin, östron ve östradiolün elüe edilmesi için metanol -% 5 gümüş nitratın (60:40) mobil fazı ile bir ODS sabit fazı kullanıldı.

En popüler olanları UV, floresans (doğal veya türetilmiş) ve elektrokimyasal olan estranların belirlenmesinde çeşitli saptama yöntemleri uygulanmıştır.

UV’nin estranların tespitine uygulanması, son yıllarda, oestranların aromatik A halkasının 280 nm’de karakteristik absorbansını tespit edebilen daha hassas ve stabil UV monitörlerinin geliştirilmesinden fayda sağlamıştır.

Bu dalga boyundaki alt saptama sınırları, 10 ng östriyolün saptanmasına izin verir. 200 nm’de artan algılama hassasiyeti mümkündür, ancak artan arka plan sinyali genellikle bu dalga boyunun kullanılmasını engeller. UV’de güçlü bir şekilde absorbe eden türevlerin oluşumu, orstanların tespitinin hassasiyetini arttırmak için kullanılan bir stratejidir.

Biyojenik amin nedir
Biyojen amin elma suyu
Biyojen amin ÇEŞİTLERİ
Adrenalin biyojen amin midir
Kadaverin nedir
Biyojen amin nedir PDF
Dekarboksilaz enzimi
Biyojenik nedir

254 nm ve 365 nm’de güçlü bir UV emiciliğine sahip moleküller üretmek için bir karbonil grubuna sahip bileşiklerle türevler oluşturan 2,4-dinitro-fenilhidrazon (DNPH) ve p-iyodobenzensülfonil esterler dahil olmak üzere çeşitli türetme prosedürleri bildirilmiştir. 254 nm’de güçlü bir UV emiciliğine sahiptir.

Estranların doğal floresansının izlenmesi, UV tespitiyle elde edilene göre hassasiyette önemli bir artış sağlar. 220 nm’lik bir eksitasyon dalga boyunu kullanan östranlar, 310 nm’lik bir birincil emisyon dalga boyu ve 608 nm’de bir ikincil emisyon verir; ikincisini kullanarak, östriyol için 100 ug’lik daha düşük bir tespit limiti bildirilmiştir.

Ostranların floresan tespiti, yüksek oranda floresan gruplar içeren türevlerin oluşturulmasıyla artırılabilir. En popüler türevlendirme prosedürü, 350 nm’lik bir uyarma dalga boyu ve 540 nm’lik bir emisyon dalga boyu ile östradiollerin tespitinin hassasiyetini östradiol için 50 pg’nin altına ve 400 pg’nin altına artıran dansil klorür kullanılarak dansilasyon olmuştur.

Elektrokimyasal algılama ayrıca elektrodepotansiyel set aralığı 0,7-0,86 VversusaAg / AgCl referans elektrodu ile östrelere de uygulanmıştır.

Östriyol, östradiol, östron, 2-hidroksiyoöstron, 4-hidroksiyoöstron, 2-metoksiyoöstron, 2-metoksiöstradiol ve ayrıca 2-hidroksiyoestradiol ve 4-hidroksiyoestradiol dahil olmak üzere çeşitli östranlar elektrokimyasal olarak tespit edilebilir.

Elektrokimyasal tespit kullanılarak estranların tespit limitlerinin 1 ng 2-hidroksiyoestradiol ve estriol için 5 ng olduğu bildirilmiştir.

Biyojenik Aminler

Biyojenik aminler, çok sayıda farmakolojik olarak aktif bileşikleri ve bunların metabolitlerini içerir ve bu nedenle, kısalık adına, bu bölüm sadece şu anda bir dizi patolojik bozukluğun teşhisi ve anlaşılmasında yer alan bileşikleri ele alacaktır. hipertansiyon, adrenal ve nöronal tümörler ve bazı psikiyatrik bozukluklar dahildir.

Son on yıl boyunca, biyojenik aminlerin konsantrasyonlarının belirlenmesi için HPLC kullanımında büyük bir artış olmuştur ve şimdi bu bileşiklerin ayrılması ve kantitasyonu için çok çeşitli HPLC teknikleri mevcuttur.

Kullanılan bazı kromatografik modlar arasında katyon değişimi, ters faz, ters fazlı iyon çifti ve ters fazlı iyon çifti bölme kromatografisi bulunur. Bu kromatografik yöntemler dizisi, UV tespiti, doğal floresans kullanılarak florimetrik tespit veya kolon öncesi veya sonrası türetme, elektrokimyasal tespit ve radyokimyasal tespit dahil olmak üzere eşit derecede geniş bir tespit teknikleri yelpazesiyle birleştirilmiştir.

Hem kromatografinin hem de saptamanın belirli yönleri, her bir yaklaşıma özgü bazı avantajlar ve dezavantajlar ile birlikte aşağıdaki bölümde tartışılacaktır.

Kromatografi

Bu bölümde başlangıçta ters fazlı kromatografiyi ve ardından yakından ilişkili iyon çifti kromatografisini ve iyon çifti bölme kromatografisini tartışacağız. Son olarak, biyojenik aminlerin ayrılmasında katyon değişim sabit fazlarının kullanımı tartışılacaktır.

Şu anda kullanılan en popüler ayırma modu, tartışmasız olarak tersine çevrilmiş fazdır. Biyojenik aminlerin ODS kolonları üzerindeki davranışı, tutmanın bileşiklerin solvofobikliği ile belirlendiğinin önerildiği bazı ayrıntılarla rapor edilmiştir.

Bununla birlikte, bu yazıda bildirilen kromatografinin kalitesinin, kısmen katekolaminler ile mobil fazda bulunan fosfat tampon arasındaki iyon eşleşmesine bağlı olduğu ileri sürülmüştür.

Bu yazarlar, mobil fazdaki nitrik asit veya sülfürik asidin iyi ayrımlar ve pik simetri sağladığını ve ayrıca çok polar biyojenik aminlerin tutulmasını sağladığını gösterdi; ayrıca trikloroasetik asit kullanımı, iyon çifti kromatografik modda sodyum oktil sülfat kullanılarak elde edilene eşdeğer tutma süreleri ve ayrılma verimlilikleri verdi.

Bu tip ayırmalar denenirse, katekolaminlerin çok polar grupları ile oktilin türetilmemiş bölgeleri arasında güçlü etkileşimlerin bulunduğu oktil bağlı silika kullanılarak zayıf tepe şekilleri bildirildiğinden, durağan fazın seçiminde dikkatli olunmalıdır. – değiştirilmiş destek oluşabilir.

Bu sorunlara rağmen, hem katekolaminlerin hem de serotoninin o-ftalaldehit (OPA) türevlerinin, 0,025 M sodyum fosfat tamponu, pH 5,1 ve% 25’lik bir başlangıç organik modifiye edici kullanan iki aşamalı bir izokratik sistemle iyi ayrıldığı bildirilmiştir ( v / v) 15 dakika sonra% 45 (v / v) metanole değiştirilen asetonitril yer alır.

Kullanılan sabit faz bir fenil kolonuydu ve bu koşullar altında elüsyon sırası histamin, noradrenalin, oktopamin, dopamin, serotonin ve tiramin idi.

Benzer ters faz ayrımları, sırasıyla 99: 1 ve 85: 15 oranlarında 0.01 M perklorik asit-asetonitril mobil fazı kullanılarak katekolaminlerin trihidroksiindol türevleri ve ayrıca türevlendirilmemiş katekolaminler ve serotonin için tarif edilmiştir.

The post Biyojenik Aminler – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).