Sonda molekülünün DNA olduğu ve hedef molekülün ribozomal RNA’nın tamamlayıcı bir zinciri olduğu ticari olarak temin edilebilen kitler popülerdir çünkü bir mikrobiyal hücre birkaç bin ribozomal RNA dizisine sahiptir, ancak DNA hedeflerinin yalnızca bir veya iki kopyasına sahiptir.

Sonuç olarak, RNA’ya yönelik bu problar, bir numunedeki düşük sayıdaki mikroorganizmayı saptamak için DNA’ya yönelik problara göre çok daha hassastır.

Prob hibridizasyon deneyleri, çok çeşitli bakteri, mantar, virüs ve protozoanın kimliğini doğrulamak için kullanılır. Bir zamanlar cinsel yolla bulaşan bakteriyel patojenleri, Chlamydia trachomatis ve Neisseria gonorrhoeae’yi doğrudan klinik örneklerde saptamak için yaygın olarak kullanılmalarına rağmen, daha hassas amplifikasyon testleri bunun yerine popülerlik kazanmıştır.

Amplifikasyon Tahlilleri

Çoğunlukla, klinik bir örnekte, bir prob tarafından tespit edilemeyecek kadar az bakteri bulunabilir. Bu problemin üstesinden gelmek için, amplifikasyon teknikleri olarak adlandırılan çeşitli yöntemler geliştirilmiştir.

Bunlardan en popüler olanı (Dr. Kary Mullis’in Nobel ödülünü kazandığı) polimeraz zincir reaksiyonu veya PCR olarak adlandırılır. Bu yöntemde örnek, bakteriyel DNA ipliklerini ayırmak için ısıtılır, karışıma bilinen bakteri primerleri eklenir ve bilinmeyen tek iplikli DNA ile eşleşirlerse onunla birleştirilir.

Primerler, orijinal DNA ipliklerinden daha kısa diziler olduğundan, nükleotidler ve ısıya dayanıklı bir Taq polimeraz enzimi (orijinal olarak Wyoming’in Yellowstone Milli Parkı’ndaki bir kaplıcada yaşayan bir bakteriden izole edilmiştir) oluşumunu tamamlamak için karışıma eklenir.

Hedef amplifikasyon nedir
Hedef amplifikasyon yöntemleri
Hedef amplifikasyon yöntemleri nelerdir
Sinyal amplifikasyon yöntemleri
Amplifikasyon yöntemleri
Hedef amplifikasyon yöntemleri nedir
Sinyal amplifikasyon nedir
Amplifikasyon yöntemleri nelerdir

Bir amplikon olarak adlandırılan yeni çift sarmallı DNA, yeniden ayrılır, yeni primerler ile tavlanır ve polimeraz enzimi varlığında nükleotidlerle genişletilir. Her bir PCR adımı, ısı döngüleyici olarak bilinen bir cihaz tarafından otomatik olarak kontrol edilen farklı bir sıcaklıkta gerçekleştirilir.

Döngü, 40 döngüye kadar devam eder, bu sırada orijinal DNA dizileri bir milyar kat arttırılır veya çoğaltılır ve bu nedenle birçok kopya tespit için kullanılabilir. Kemilüminesan veya EIA tipi renkli sinyal sağlayan haberci moleküller ile etiketlenmiş problar, amplikon tespiti için popüler yöntemlerdir. PCR reaksiyonundaki adımları göstermektedir.

Klinik örneklerde mikroorganizmaların hızlı tespiti için başka nükleik asit amplifikasyon tahlilleri geliştirilmiştir, ancak prensipleri PCR’ninkine benzer.

Amplifikasyon reaksiyonunu başlatmak için uygun primer sekansı mevcut olduğu sürece, herhangi bir enfeksiyöz ajanı tespit etmek için bir amplifikasyon testi geliştirilebilir.

Bu testler çok hassas olduğundan, klinik örneklerin amplifiye edilebilecek ve yanlış pozitif reaksiyonlarla sonuçlanabilecek yabancı DNA ile kontamine olmasını önlemek için laboratuvarda büyük özen gösterilmelidir.

Klinik mikrobiyoloji laboratuvarında antijen saptama, prob ve amplifikasyon testlerinin kullanımı Bölümler VIII, X ve XI’de daha ayrıntılı olarak tartışılmaktadır.

Sorular

1. Pek çok klinik mikrobiyoloji laboratuvarında kullanılan iki ana kültür dışı teknoloji türü nelerdir?
2. Enfeksiyöz bir hastalığın laboratuvarda teşhisi için kültür dışı yöntemlerin kültür prosedürlerine göre üç avantajını listeleyin.
3. Üç tip immunoassay adlandırın.
4. Direkt immunoassay testinin dolaylı testten farkı nedir?
5. “işaretleyici” molekül nedir?
6. İki ana nükleik asit saptama yöntemini adlandırın.
7. Nükleik asit amplifikasyon testleri, nükleik asit prob testlerinden neden daha hassastır?
8.PCR testi nedir? Her adım öncesindeki inkübasyon sıcaklığı nedir?
9. Taq polimerazın hangi önemli özelliği PCR reaksiyonunda kullanımına izin verdi?
10. Primer, amplikon ve termal döngüleyiciyi kısaca tanımlayın.

Solunum Yolu Mikrobiyolojisi

Stafilokok

Stafilokoklar çevremizde ve vücudumuzun normal florasında her yerde bulunur. Ön burunlar ve faringeal yüzeyler dahil olmak üzere özellikle ciltte ve üst solunum yolunda sayısızdırlar.

Bazıları da bulaşıcı insan hastalıkları ile ilişkilidir. Stafilokoklar, karakteristik olarak üzüm gibi düzensiz kümeler halinde düzenlenmiş gram pozitif koklardır. Çoğu besleyici ortamda iyi büyüyen dayanıklı, fakültatif anaerobik organizmalardır.

Klinik olarak önemli üç ana tür vardır: Staphylococcus epider- midis, Staphylococcus saprophyticus ve Staphylococcus aureus. S. epidermidis, adından da anlaşılacağı gibi, cilt ve mukoza zarları dahil olmak üzere insan yüzey dokularında en sık yaşayan canlıdır.

Genellikle patojenik değildir, ancak örneğin kalp cerrahisi hastalarında veya kalıcı intravenöz kateterleri olanlarda yüzey bariyerlerini geçmek için alışılmadık bir fırsata sahipse ciddi enfeksiyonlara neden olabilir. S. saprophyticus, yaklaşık 16-25 yaşındaki genç kadınlarda akut idrar yolu enfeksiyonlarında rol oynamaktadır.

Normal flora arasında bulunmamıştır ve diğer enfeksiyon türlerine neden olduğu henüz bilinmemektedir. Tamlık için bu alıştırmaya dahil edilmiştir. S. epidermidis gibi, S. aureus genellikle sağlıklı kişilerin normal florasında bulunur, ancak bunun tersine, çoğu stafilokok hastalığına bu türün suşları neden olur.

S. aureus suşları, enfekte konağın hücreleri üzerinde zararlı etkiler yaratabilen bir dizi toksin ve enzim üretir. Hemolizinleri kırmızı kan hücrelerini yok edebilir. Enzim koagülaz plazmayı koagüle eder, ancak bunun stafilokok enfeksiyonundaki kesin rolü henüz bilinmemektedir.

Lökosidin, lökositleri yok eden stafilokokal bir toksindir. Hyaluronidaz, bağ dokusunun yapısal bir bileşeni olan bir substrata etki eden bir enzimdir. Lokal enfeksiyon alanındaki aktivitesi dokuyu parçalar ve stafilokokların daha derinlemesine nüfuz etmesine izin verir; bu nedenle “yayılma faktörü” olarak adlandırılır. (Bazı streptokoklar ayrıca hyaluronidaz üretir.)

Stafilokinaz, fibrin pıhtılarını çözerek, aksi takdirde vücudun lifli reaksiyonları tarafından duvarla kaplanacak olan organizmaların istilasını artırabilir.

Bir enterotoksin, bazı S. aureus suşları tarafından detaylandırılmıştır. Bunlar kontamine gıdalarda çoğalıyorsa, ürettikleri enterotoksin şiddetli gastroenterit veya stafilokokal gıda zehirlenmesinden sorumlu olabilir.

Bazı suşlar, TSST-1 olarak adlandırılan bir toksini ayrıntılandırarak toksik şok sendromu (TSS) üretir. Bu hastalık, esas olarak yüksek emici tampon kullanan adet gören kadınlarda görülür.

The post Amplifikasyon Tahlilleri – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri first appeared on Online (Parayla Ödev Yaptırma).